NK細胞功能與HCV感染及抗病毒治療轉歸的研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究NK 細胞功能與HCV感染及抗病毒治療后不同轉歸間的關系；
　　 2.比較丙型肝炎患者NK細胞功能的體內外差異；
　　 3.探討丙肝患者抗病毒治療過程中NK 細胞功能的動態(tài)變化及其與病毒載量、基因型的關系。
　　 方法：
　　 1.病例：（1）慢性HCV 感染患者49例，其中未治療者30例，應用IFN-α聯(lián)合利巴韋林治療者19例（2）感染HCV后自發(fā)清除病毒者5例（3）經過抗

2、病毒治療后持續(xù)病毒學應答患者18例（4）經過抗病毒治療后非持續(xù)病毒學應答患者17例（5）
　　 健康對照18例。已排除其它病毒合并感染，取外周肝素鈉抗凝血備檢。
　　 2．采用ELISA 檢測HCV 抗體，序列特異性引物聚合酶鏈反應（SSP-PCR）方法檢測HCV基因分型。應用Real time-PCR 定量檢測HCV-RNA 水平，包括未治療、治療后持續(xù)或非持續(xù)應答及自發(fā)恢復的丙肝患者在入組時；接受治療的病人在治療前及

3、治療4周、12周、24周時間點。
　　 3．采用易得人淋巴細胞分離管分離出外周血單個核細胞（PBMC），利用CFSE/PI染色方法檢測NK 細胞對K562 細胞的殺傷活性。
　　 4．流式染色技術檢測NK 細胞及其亞型的頻率，NK 細胞表面激活及抑制性受體的頻率，細胞內細胞因子染色檢測細胞因子IFN-γ及TNF-α的分泌情況。
　　 5．將一部分健康對照及慢性丙肝患者分離出的PBMC 加入細胞因子（rh IL-2

4、及rh IL-15）進行體外培養(yǎng),72h后檢測NK 細胞表面受體及分泌細胞因子的變化。
　　 6.Flowjo Software 對流式圖進行處理，SPSS13.0 對數據進行統(tǒng)計分析，p值<0.05認為有顯著差異性。
　　 結果：
　　 1.慢性HCV 感染及治療后不同轉歸患者組間NK 細胞、亞型、表面受體、殺傷活性及分泌細胞因子頻率的比較：
　　 （1）慢性丙肝患者外周血NK 細胞殺傷活性，表達受體N

5、KG2D及分泌細胞因子IFN-γ，TNF-α頻率明顯低于健康對照組（p＜0.01），受體NKG2C顯著低于自發(fā)恢復組（p＜0.01）；受體NKp30，NKp44及NKG2A 顯著低于持續(xù)應答組（p＜0.05）。
　　 （2）與治療后持續(xù)應答患者相比，非持續(xù)應答者NK細胞殺傷活性顯著減低（p＜0.01）；此外其殺傷活性，受體NKG2D及分泌細胞因子IFN-γ，TNF-α頻率明顯低于健康對照，受體NKG2A 則相反（p＜0.05）。

6、
　　 （3）持續(xù)應答患者NK 細胞表面活化性受體NKp46,NKp30,NKp44,NKG2D及NKG2A 與較非持續(xù)應答者高，分泌細胞因子IFN-γ，TNF-α能力亦較強，但沒有達到統(tǒng)計學差異。
　　 （4）自發(fā)恢復的HCV 感染者外周血NK 細胞、受體NKp46、NKG2C及分泌細胞因子TNF-α頻率高于非持續(xù)應答患者（p＜0.05）。
　　 2.體外培養(yǎng)后，慢性HCV 感染患者NK 細胞頻率降低，顯著低于

7、健康對照組培養(yǎng)以后（p＜0.01），但受體NKG2A及NKG2C 頻率增加，高于健康對照組（p＜0.05）。
　　 非持續(xù)應答組細胞體外培養(yǎng)后，NK 細胞分泌IFN-γ及TNF-α均低于健康對照組培養(yǎng)后（p＜0.05）。
　　 3.慢性丙肝患者及非持續(xù)應答患者血清病毒滴度及ALT 水平與NK 細胞功能無相關性。
　　 4.慢性丙肝患者治療過程中NK 細胞、亞型及表面受體的頻率和功能活性變化：
　　 （1）

8、低病毒載量及非基因1 型患者CD56 dim NK 細胞頻率下降，CD56 bright NK 細胞頻率增加。（2）低病毒載量及非基因1 型患者抑制性受體NKG2A 頻率增加，高病毒載量及基因1 型患者活化性受體NKG2D 減少。
　　 （3）高病毒載量及基因1 型患者NK 細胞分泌細胞因子IFN-γ，TNF-α能力下降。
　　 結論：
　　 1.NK 細胞功能與HCV 感染及治療后轉歸有關，慢性HCV 感染者體

9、內NK 細胞功能受損，自發(fā)恢復者及治療持續(xù)應答患者NK 細胞活性高于慢性丙肝患者及非持續(xù)應答患者。
　　 2.慢性丙肝患者體內外NK 細胞功能與健康人存在差別。
　　 3.慢性丙肝患者及非持續(xù)應答患者血清病毒滴度、ALT水平與NK細胞功能無相關性。
　　 4.與低病毒載量及非基因1型患者相比，高病毒載量及基因1型患者在抗病毒治療過程中NK 細胞功能活性沒有得到改善甚至降低。
　　 本課題的創(chuàng)新點：

10、　　 1.比較系統(tǒng)地研究了NK 細胞功能活性與HCV 感染及治療后轉歸的關系。
　　 2.對丙肝患者體內外NK 細胞功能的對比研究有助于進一步認識NK 細胞功能與HCV感染的關系。
　　 3.動態(tài)監(jiān)測丙肝患者抗病毒治療過程中NK 細胞功能的變化，以期預測患者對治療的應答及治療后的轉歸。
　　 本課題研究的意義：
　　 1.研究結果顯示NK 細胞功能對HCV 感染后轉歸及抗病毒治療效果均有直接影響，有助于