NO在擠壓大鼠雙后肢致遠隔器官肺臟和肝臟細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：廣泛軟組織損傷在法醫(yī)學實踐中較為常見。當肢體受到打擊或擠壓作用后，不僅肢體局部組織出現(xiàn)嚴重損傷，而且常常引起機體遠隔器官如腎臟、肺臟、肝臟的嚴重功能障礙、多器官功能不全綜合征(MODS)乃至機體死亡。本室以往的研究發(fā)現(xiàn)，擠壓大鼠雙后肢可導致遠隔器官如肝臟、腎臟、肺臟等功能障礙，同時肺臟、肝臟以及擠壓的局部肌組織中誘生型一氧化氮合酶(iNOS)表達上調、NO生成增加，NO參與介導肢體擠壓傷引起的肝臟和肺臟損傷，然而NO的作用機制尚未

2、完全闡明。有報道，NO通過誘導細胞凋亡增多而參與介導器官損傷。細胞凋亡是一個程序化的過程，Caspase蛋白酶、Bcl-2基因家族、Ced基因、p53、Fas和Fas-L等多種因素參與調控細胞凋亡。迄今為止，肢體擠壓傷導致遠隔器官細胞凋亡的發(fā)生規(guī)律、NO參與介導遠隔‘器官的細胞凋亡及其作用機制尚不清楚。本實驗擬在復制擠壓大鼠雙后肢致遠隔器官損傷的基礎上，使用NOS抑制劑和底物調節(jié)大鼠NO生成量，觀察肺臟和肝臟的細胞凋亡變化及Bcl-2、

3、Bax、Caspase-3等凋亡相關蛋白的表達，以探討NO的作用機制。 方法：實驗分為(1)對照組(S組)，(2)擠壓組(C組)，(3)擠壓加氨基胍組(A組)，(4)擠壓加L-精氨酸組(L組)。制備擠壓組(C)大鼠模型，連續(xù)擠壓大鼠雙后肢5h后，釋放大鼠，觀察5h后，經(jīng)腹主動脈快速放血處死，收集檢材待檢。S組除不擠壓外，其余處理同擠壓模型。A組在擠壓5h松開時舌下靜脈注入氨基胍10mg/kg。L組在擠壓5h松開時舌下靜脈注入L-

4、精氨酸150mg/kg。留取肺臟、肝臟組織適量，常規(guī)制作石蠟組織切片，用原位末端標記法(TUNEL)檢測肺臟和肝臟的細胞凋亡變化，用免疫組化方法檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表達，并觀察組織病理學變化。用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)用x±s表示，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用最小顯著差異法(least significant difference，LSD)作兩兩比較

5、，P<0.05為有顯著性差異。 結果：1.擠壓大鼠雙后肢誘導肺臟和肝臟的細胞凋亡增多在肺臟，細胞凋亡主要分布于支氣管粘膜上皮、血管內皮細胞；與S組相比，C組細胞凋亡指數(shù)明顯增加(P<0.01)；與C組比較，L組凋亡細胞指數(shù)明顯增高(P<0.05)，A組凋亡細胞指數(shù)明顯降低(P<0.05)。在肝臟，細胞凋亡主要分布在血管內皮細胞；與S組相比，C組細胞凋亡指數(shù)明顯增加(P<0.01)；與C組比較，L組凋亡細胞指數(shù)明顯增高(P<0.0

6、5)，A組凋亡細胞指數(shù)明顯降低(P<0.05)。 2.擠壓大鼠雙后肢誘導肺臟和肝臟的Bcl-2蛋白表達變化在肺臟，Bcl-2蛋白陽性信號主要分布在支氣管粘膜、肺血管內皮細胞；與S組比較，C組陽性信號明顯降低(P<0.01)；與C組比較，L組陽性信號明顯降低(P<0.05)，A組陽性信號強度明顯增高(P<0.05)。在肝臟，Bcl-2蛋白陽性信號主要分布于肝竇內皮細胞；與S組比較，C組陽性信號強度明顯降低(P<0.01)；與C組比

7、較，A組陽性信號強度明顯增高(P<0.05)，L組陽性信號強度明顯降低(P<0.05)。 3.擠壓大鼠雙后肢誘導肺臟和肝臟的Bax蛋白表達變化在肺臟，Bax蛋白陽性信號主要分布于肺支氣管粘膜和肺血管內皮細胞；在肝臟，Bax蛋白陽性信號主要分布于肝竇內皮細胞；各組Bax蛋白陽性信號在肺臟、肝臟中的表達呈現(xiàn)一致性變化，即在S組Bax蛋白陽性信號處于較低水平；與S組比較，C組陽性信號明顯增高(P<0.01)；與C組比較，A組陽性信號

8、明顯降低(P<0.05)，L組陽性信號明顯增高(P<0.05)。 4.擠壓大鼠雙后肢誘導肺臟和肝臟的Caspase-3蛋白表達變化在肺臟，Caspase-3蛋白陽性信號主要分布于支氣管粘膜和肺血管內皮細胞；在肝臟主要分布于肝竇內皮細胞；各組Caspase-3蛋白陽性信號在肺臟、肝臟中的表達呈現(xiàn)一致性變化，即在S組Caspase-3蛋白陽性信號處于較低水平；與S組比較，C組陽性信號明顯增高(P<0.01)：與C組比較，A組陽性信號