

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文檔簡介
1、目的:本實驗致力于研究柔肝化纖顆粒對肝纖維化大鼠肝組織激活素A(ACTA)表達、血清卵泡抑素(FS)及肝細胞凋亡的影響,從而探討柔肝化纖顆粒抗肝纖維化的作用及其機制,完善該藥對TGF-β超家族其它成員的影響,進一步從TGF-β超家族信號轉(zhuǎn)導(dǎo)水平上闡明中藥治療肝纖維化的作用機制及名老中醫(yī)治療肝病的學術(shù)理論,找出作用靶點的規(guī)律并整理提高,豐富中醫(yī)藥對肝纖維化的防治方法和方藥。
方法:本實驗選用健康清潔級大鼠120只,雌雄各半,
2、體重220~250g,隨機取16只作為正常對照組(A組)。剩余大鼠進行肝纖維化造模,于第4周末造模大鼠隨機處死8只,證實肝纖維化形成后,將其余造模大鼠隨機分為病理模型組(B組)、柔肝化纖顆粒大、中、小劑量組(C組,D組,E組)、大黃蟅蟲丸(F組)及秋水仙堿對照組(G組)共6組,每組16只。采用四氯化碳(CCl4)復(fù)合法大鼠肝纖維化模型,A、B組4周后灌胃與治療組同容積的生理鹽水;C、D、E、F、G組造模4周后分別給予柔肝化纖顆粒大(20
3、g/kg)、中(10g/kg)、小劑量(5g/kg)、大黃蟅蟲丸(0.2g/kg)、秋水仙堿(100μg/kg)灌胃,以上各組分別于用藥治療后6周、12周處死,剖取肝臟,HE染色后用光鏡觀察大鼠肝組織病理變化和免疫組化法檢測激活素A(ACTA)表達、血清卵泡抑素(FS)、肝細胞凋亡的情況。
結(jié)果:
(1)一般情況:
病理模型組大鼠隨造模時間的延長,逐漸出現(xiàn)皮毛稀松、色黃、無光澤,進食及飲水量減少
4、,體重減輕,部分大鼠大便溏瀉。正常對照組在整個實驗期間,皮毛緊密、色白、有光澤,飲食情況好,活潑好動,體重增加。各治療組開始治療后,攝食、體重增加,毛色逐漸光潤,活動趨于正常。病理模型組動物較另外6組動物瘦弱,皮毛無光澤,倦怠,精神萎靡,進食明顯減少,激惹后煩躁易怒。
(2)肝組織HE及Masson膠原纖維染色光鏡下觀察:
模型組多數(shù)正常小葉結(jié)構(gòu)被破壞或消失,由匯管區(qū)和中央靜脈伸出粗大膠原纖維條索分割、包繞肝
5、小葉,肝細胞索排列紊亂,肝細胞水腫明顯,脂肪變性廣泛,部分有壞死。纖維隔內(nèi)有大量單核細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞及成纖維細胞等細胞浸潤。與模型組比較,各藥物治療組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕,肝臟膠原纖維增生亦明顯減輕,纖維條索疏松變窄。肝細胞水腫好轉(zhuǎn),變性情況明顯改善,炎細胞浸潤減少。其中以柔肝化纖顆粒高、中劑量組肝臟結(jié)構(gòu)改善較為明顯。
(3)免疫組化結(jié)果:
正常組肝組織中幾乎不表達ACTA,模型組ACTA陽性表
6、達主要位于中央小葉和門靜脈周圍肝細胞中,并在Kuffer細胞、類間質(zhì)細胞質(zhì)及其周圍也可見其表達,柔肝化纖顆粒治療組陽性染色程度均較模型組明顯減輕(P<0.01)。
(4)RT-PCR
正常肝組織幾乎不表達ACTAmRNA,而模型組表達明顯增強,ACTA/GAPDH比值為(0.61±0.21),遠高于正常(P<0.01);柔肝化纖顆粒高、中、低各治療組ACTA/GAPDH比值明顯降低(P<0.01)
7、 (5)血清FS的表達變化:
柔肝化纖顆粒大、中劑量組升高血清FS水平的表達均優(yōu)于秋水仙堿組和大黃蟅蟲丸治療組(P<0.05);柔肝化纖顆粒小劑量組與秋水仙堿組、大黃蟅蟲丸組比較差異無明顯意義(P>0.05)。
(6)柔肝化纖顆粒對肝纖維化大鼠肝細胞凋亡的影響:
正常組大鼠肝組織中偶見凋亡細胞,模型組大鼠肝小葉內(nèi)有較多凋亡肝細胞,胞核呈棕黃色。模型組大鼠肝細胞凋亡較正常組明顯升高(P<0.01
8、);柔肝化纖顆粒大、中、小劑量治療組肝細胞凋亡均較模型組有明顯的降低(P<0.01),其中柔肝化纖顆粒高劑量組肝細胞凋亡較低劑量組顯著降低(P<0.05)。
結(jié)論:
(1)柔肝化纖顆粒能夠改善肝纖維化大鼠的精神狀態(tài),皮毛色澤,飲食情況,體重等一般情況。
(2)柔肝化纖顆粒能夠明顯減輕大鼠肝纖維化的程度,有比較強的抗肝纖維化作用。
(3)柔肝化纖顆??梢越档虯CTA的表達和升高血清F
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