2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:KDR基因重組噬菌體疫苗的構建及抗腫瘤效應的初步研究 背景和目的:腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴新生血管的生成,VEGF及其受體VEGFR系統(tǒng)在腫瘤新生血管生成過程中起了主導作用,利用主動免疫打破對自身抗原(與血管形成相關)的免疫耐受是目前腫瘤治療的一個熱點,血管內(nèi)皮細胞基因穩(wěn)定,不存在MHCⅠ和MHCⅡ抗原的下調(diào),以血管內(nèi)皮生長因子受體為靶點有別于傳統(tǒng)的腫瘤疫苗,KDR是介導VEGF在腫瘤新生血管形成中發(fā)揮功能的主要受體,KD

2、R與VEGF的親和力雖然較弱,而其酪氨酸激酶活性很強,在VEGF介導的血管形成特性中,如促有絲分裂作用,化學趨化作用,誘導形態(tài)改變起主要作用,其特點決定了KDR是腫瘤抗血管治療的一個重要靶點,本實驗以T7噬菌體為載體,構建KDR基因重組的噬菌體疫苗,探討其對C57BL/6J純系小鼠Lewis肺癌模型上的抗腫瘤效果。 結果:人肺癌組織cDNA的PCR產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳,確認目標條帶位置正確,從轉(zhuǎn)化的克隆株中挑取陽性克隆,經(jīng)

3、質(zhì)粒提取和測序,確認KDR膜外區(qū)基因克隆成功。以亞克隆引物(PrimerⅡ)PCR擴增目標重組片段,經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳,目標帶位置與預期吻合。T7-KDR基因組經(jīng)Up-Down引物以及測序鑒定,證實亞克隆片斷被成功克隆到T7噬菌體基因組中,經(jīng)SDS-PAGE及WesternBlot抗原性檢測,確認P10B融合蛋白的表達情況及其KDR抗原性,重組噬菌體疫苗構建成功。各實驗組免疫后,T7-KDR免疫組抑制程度明顯,潛伏期短,腫瘤生長速

4、度最慢,腫瘤重量與NS組和PC組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.05),PC組與NS組相比無統(tǒng)計學差異(P≤0.05)。小鼠血清稀釋至1:1000,特異性抗KDR抗體仍呈陽性。結論:成功構建了KDR基因重組T7噬菌體疫苗,小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了特異性抗KDR抗體,該噬菌體疫苗對小鼠Lewis肺癌具有明顯的抗腫瘤作用,用人源KDR作為免疫原免疫小鼠通過免疫交叉反應可以打破對自身抗原的免疫耐受,產(chǎn)生特異性的免疫反應。我們的實驗研究為腫瘤的免疫治療和研究提

5、供了新的思路和方法,T7噬菌體作為表達載體也可應用于其他腫瘤生長相關的因子和受體構建基因重組疫苗。 第二部分:異種血管內(nèi)皮生長因子基因重組T7噬菌體疫苗對小鼠Lewis肺癌的抑制作用 背景與目的:腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移與腫瘤血管生成有密切關系,其中血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是作用最強、特異性最高的調(diào)控因子,因此成為抗腫瘤血管新生的良好靶點。腫瘤疫苗是癌癥治療與研

6、究很有潛力的途徑。噬菌體疫苗屬于病毒載體疫苗,并兼有蛋白疫苗和DNA疫苗的優(yōu)點,在抗腫瘤研究中有良好應用前景。本實驗制備人VEGFl65基因重組T7噬菌體疫苗,檢測其VEGF抗原性,并初步觀察其誘導產(chǎn)生的內(nèi)源性抗VEGF抗體在C57BL/6J純系小鼠Lewis肺癌模型上的抗腫瘤效果。 結論:初步建立了VEGF基因重組噬菌體疫苗的開發(fā)平臺。成功構建了VEGF基因重組T7噬菌體疫苗,該疫苗誘導產(chǎn)生的內(nèi)源性抗體在一定程度上抑制了Lew

7、is腫瘤的生長。以異種同源蛋白質(zhì)作為免疫原能誘導機體產(chǎn)生免疫反應。 第三部分:表達EGFR的噬菌體疫苗對小鼠異位移植腫瘤的免疫治療 背景與目的:國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)人類許多惡性腫瘤細胞都有表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)的表達增強和自分泌表皮生長因子類的能力,并通過自分泌或旁分泌機制促進腫瘤生長,因此成為腫瘤的分子靶向治療的熱點。以噬菌體為載體制備腫瘤疫苗屬于病毒載體疫苗

8、,并兼有蛋白疫苗和DNA疫苗的優(yōu)點,在抗腫瘤研究中有良好應用前景。制備5個表達雞源表皮生長因子受體(cEGFR)部分肽段的基因重組T7噬菌體疫苗,檢測其EGFR抗原性,并初步觀察其誘導產(chǎn)生的內(nèi)源性抗EGFR抗體在C57BL/6J純系小鼠Lewis肺癌模型上的抗腫瘤效果。 結論:初步建立了EGFR基因重組噬菌體疫苗的開發(fā)平臺。成功構建了5個cEGFR基因重組T7噬菌體疫苗,該疫苗誘導產(chǎn)生的內(nèi)源性抗體在一定程度上抑制了EGFR陽性腫

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