重組噬菌體口服疫苗誘導(dǎo)系統(tǒng)性的細(xì)胞免疫反應(yīng)及其體內(nèi)抗腫瘤效果研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、該課題以E.G7-OVA細(xì)胞構(gòu)建的C57BL/6(H-2K<'b>荷瘤小鼠為模型,進(jìn)行了口服呈現(xiàn)CTL表位OVA<,257-264>肽(SIINFEKL)的噬菌體顆粒的體內(nèi)免疫效應(yīng)和抗腫瘤效果研究.首先構(gòu)建gpⅧ呈現(xiàn)CTL表位OVA<,257-264>肽(SIINFEKL)的重組噬菌體.實(shí)驗(yàn)采取定點(diǎn)突變、PCR擴(kuò)增、T載體連接等分子克隆手段,通過(guò)一系列亞克隆步驟,在M13KE噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白的擴(kuò)增片段中引入PvuII和BamHI兩個(gè)限制性

2、酶切位點(diǎn),合成帶有XbaI和EcoRV酶切位點(diǎn)并含CTL表位SIINFEKL肽的寡核苷酸序列,將其連入M13KE噬菌體的gⅧ的N末端.使重組絲狀噬菌體M13KEova能夠表達(dá)帶有MHC-I類(lèi)分子H-2K<'b>限制性的CTL表位的融合蛋白.通過(guò)限制性酶切,鑒定M13KE RF DNA帶有克隆入的OVA寡核苷酸序列;用重組噬菌體體外超感染XL1-Blue大腸桿菌,回收擴(kuò)增的重組噬菌體病毒顆粒,采用H.Schagger和G.Von Jago

3、w建立的低分子量蛋白質(zhì)凝膠電泳方法鑒定,證實(shí)所構(gòu)建的重組噬菌體M13KEova表達(dá)gpⅧ和OVA<,257-264>肽的融合蛋白.重組噬菌體聯(lián)合粘膜免疫佐劑CT及CTB口服免疫C57BL/6(H-2K<'b>小鼠,并且轉(zhuǎn)染了pAc-neo-OVA質(zhì)粒的EL4細(xì)胞(E.G7-OVA細(xì)胞)構(gòu)建預(yù)防性腫瘤保護(hù)動(dòng)物模型,通過(guò)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)情況和荷瘤小鼠的存活率觀察表位呈現(xiàn)重組噬菌體的體內(nèi)免疫效應(yīng).該研究結(jié)合噬菌體呈現(xiàn)技術(shù)、基于表位設(shè)計(jì)疫苗和口服

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