糖尿病骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)制與滋陰補(bǔ)腎方藥的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、該研究通過(guò)建立糖尿病性骨質(zhì)疏松大鼠模型,制備晚期糖化終末產(chǎn)物多克隆抗體,檢測(cè)大鼠骨密度、骨組織中Ⅰ型膠原和晚期糖化終末產(chǎn)物的含量以及骨代謝相關(guān)的一些生化指標(biāo),對(duì)晚期糖化終末產(chǎn)物在糖尿病性骨質(zhì)疏松發(fā)病中的作用做了進(jìn)一步的探討,并以氨基胍為對(duì)照觀察滋陰補(bǔ)腎方藥對(duì)晚期糖化終末產(chǎn)物形成的抑制作用以期達(dá)到對(duì)糖尿病骨質(zhì)疏松的防治作用. 方法:選用48只6月齡雌性SD大鼠,體重190~220克,隨機(jī)取出12只作為正常對(duì)照組(CG組),其余大鼠左下腹腔

2、注射鏈脲佐菌素(STZ)(劑量為40mg/Kg體重),72小時(shí)后測(cè)血糖,凡血糖≥13.8mmol/L的大鼠選入實(shí)驗(yàn),再隨機(jī)分為3組,分別為:病理模型組(DM組)、氨基肌組(AG組)、中藥治療組(HD組).以上四組正常飼料喂養(yǎng),正常對(duì)照組和病理組自由飲水.中藥治療組按人和動(dòng)物間體表面積折算的等效劑量比值<'[4]>,每只大鼠3ml/大,中藥灌胃(含生藥1g/ml).AG治療組用稀釋成3﹪的AG溶液灌養(yǎng).在20~25℃室溫下,持續(xù)飼養(yǎng)12周

3、,并分別在6周和12周時(shí)檢測(cè)血糖、尿糖、體重一次.12周后禁食24小時(shí)收集尿液,股動(dòng)脈放血處死,分離血清用于檢測(cè)血鈣、血磷、血堿性磷酸酶、骨鈣素等血生化指標(biāo),取左側(cè)勝骨干4﹪多聚甲醛中固定,用于骨 Ⅰ型膠原和糖化終未產(chǎn)物的免疫組化,取右側(cè)股骨和脛骨測(cè)定骨密度.在建模和用藥的同時(shí),選用2只雌性新西蘭大白兔,用提前制備和純化的AGE-BSA配免疫佐劑分次注射,瓊脂糖雙擴(kuò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗體滴度,免疫6次后抗體滴度達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),頸動(dòng)脈取血,飽和硫酸銨鹽沉

4、淀法純化抗體,用于晚期糖化終末產(chǎn)物的檢測(cè).小結(jié):1 應(yīng)用高糖孵育BSA可制備具有特異熒光的晚期糖化終末產(chǎn)物(AGE),純化AGE-BSA免疫新西蘭大白兔可獲得特異性AGE抗體并可用于免疫組化法檢測(cè)骨AGE.2 探討并發(fā)現(xiàn)了AGE與骨質(zhì)疏松的關(guān)系,長(zhǎng)期高血糖可造成骨組織內(nèi)AGE明顯增加,導(dǎo)致骨膠原含量降低,骨有機(jī)質(zhì)減少,鈣沉積減少,骨密度降低,導(dǎo)致骨質(zhì)疏松.3 氨基肌通過(guò)抑制骨內(nèi)AGE的積聚,可減輕糖尿病大鼠骨質(zhì)疏松,為擴(kuò)大氨基肌的應(yīng)用提