血管內(nèi)選擇性腦低溫治療急性局灶性腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立一種穩(wěn)定、可重復(fù)性好、標(biāo)準(zhǔn)化的兔線栓法大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型,并探討腦電趨勢(shì)圖[振幅整合腦電圖(aEEG)和波段功率]、改良神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分(mNSS)等定量檢測(cè)方法對(duì)缺血范圍及體積判斷的價(jià)值。
　　 2.建立兔頸內(nèi)動(dòng)脈選擇性冷生理鹽水灌注腦低溫模型,探索合適的灌注溫度、灌注速度和灌注時(shí)間,探討冷生理鹽水灌注對(duì)生命體征、血?dú)庵笜?biāo)、血鈉和血液稀釋等的影響。
　　 3.采用aEEG篩

2、選MCAO動(dòng)物,予以頸內(nèi)動(dòng)脈選擇性冷生理鹽水灌注腦低溫治療,探討選擇性腦低溫對(duì)顱內(nèi)壓、腦灌注壓、梗死體積、腦水腫、mNSS以及腦損傷特異生化指標(biāo)等的影響,評(píng)價(jià)選擇性腦低溫對(duì)急性局灶性腦缺血的保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 1.采用隨機(jī)設(shè)計(jì),36只普通級(jí)雄性新西蘭白兔隨機(jī)分組,分別予以血管鑄型,臺(tái)盼藍(lán)灌注,MCAO模型(n=29)及假手術(shù)(n=5)處理。線栓法制作MCAO模型,行腦功能監(jiān)護(hù),根據(jù)TIC染色結(jié)果將MCAO模型

3、組分為皮層+基底節(jié)梗死組(n=11)、基底節(jié)梗死組(n=7)、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(n=5)和無(wú)病灶組(n=6)。比較各亞組生理指標(biāo)術(shù)前術(shù)后的差異,應(yīng)用ImageTool圖像分析系統(tǒng)測(cè)量梗死體積,比較各亞組體重、線栓指標(biāo)之間的差異,分析其與相對(duì)梗死體積的關(guān)系。連續(xù)腦功能監(jiān)護(hù),比較aEEG和波段功率各亞組間的差異及每亞組術(shù)前術(shù)后的差異,分析aEEG降幅與相對(duì)梗死體積的關(guān)系。
　　 2.采用隨機(jī)設(shè)計(jì),20只普通級(jí)雄性新西蘭白兔隨機(jī)分為5

4、0ml/h灌注組(I1組,n=5),99ml/h灌注組(I2組,n=5)和綜合灌注組(13組,n=10)。采用頸內(nèi)動(dòng)脈置管,選擇性冷生理鹽水(6.0±0.5℃)灌注,比較50ml/h和99ml/h兩灌注組降溫效率的差異,根據(jù)不同速率的降溫效果制定綜合降溫組灌注方案。探索綜合降溫組腦低溫治療過(guò)程中腦溫變化對(duì)肛溫的影響以及二者之間的關(guān)系。比較綜合降溫組腦低溫治療過(guò)程中心率、平均動(dòng)脈壓、血細(xì)胞比積、鈉離子濃度、血?dú)獾戎笜?biāo)的變化,分析腦溫變化與

5、各指標(biāo)之間的關(guān)系。觀察灌注后組織形態(tài)學(xué)改變情況。正常兔冷生理鹽水灌注前后及不同速度的比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析；灌注前后及不同部位溫度的比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析；灌注前后不同時(shí)間點(diǎn)各生理指標(biāo)之間的比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析；隨冷鹽水灌注的持續(xù),腦溫下降與肛溫、心率、平均動(dòng)脈壓、血細(xì)胞比積、鈉離子濃度之間的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。
　　 3.采用隨機(jī)設(shè)計(jì),32只普通級(jí)雄性新西蘭白兔隨機(jī)分為MCAO組(M組,n=8),MC

6、AO+冷生理鹽水灌注組(分為灌注30min和60min亞組,即I1,I2組,各8只),MCAO+38℃生理鹽水灌注組(B組,n=8)。各組制作MCAO模型,應(yīng)用aEEG篩選入組動(dòng)物(上界降幅>0.261),入選的造模動(dòng)物予以不同方案灌注,比較各組各時(shí)間點(diǎn)生理指標(biāo)之間的差異。術(shù)中連續(xù)監(jiān)測(cè)有創(chuàng)顱內(nèi)壓,計(jì)算腦灌注壓,比較各組及不同時(shí)間點(diǎn)之間顱內(nèi)壓及腦灌注壓之間的差異。術(shù)后48h各組腦組織經(jīng)TTC染色后,應(yīng)用ImageTool圖像分析系統(tǒng)測(cè)量梗

7、死體積、水腫范圍,根據(jù)公式計(jì)算相對(duì)梗死體積和腦水腫指數(shù),比較各組相對(duì)梗死體積,水腫指數(shù)之間的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.兔Willis環(huán)完整,類似于人類。線栓法MCAO模型成功率為62.07％(18/29),其中累及皮層和基底節(jié)的占11例37.93％(11/29),僅累及基底節(jié)的占24.38％(7/29)。4亞組之間的基線資料均衡(P>0.05),術(shù)后皮層+基底節(jié)梗死組血糖顯著高于基底節(jié)梗死組和無(wú)病灶組(均P<0.0

8、5)。各組組內(nèi)體重之間的差異有顯著性意義(F=3.608,P=0.017),無(wú)病灶組體重分別顯著低于皮層+基底節(jié)梗死組和基底節(jié)梗死組(均P<0.05)。各組組內(nèi)線栓置入深度之間的差異有顯著性意義(F=4.985,P=0.008),皮層+基底節(jié)梗死組顯著小于蛛網(wǎng)膜下腔出血組且顯著大于無(wú)病灶組(均P<0.05)。皮層+基底節(jié)梗死組體重、線栓頭端直徑、線栓置入深度與相對(duì)梗死體積的線性回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.488,P=0.047),決定

9、系數(shù)為0.658,對(duì)相對(duì)梗死體積影響由大到小依次為線栓置入深度,體重和線栓頭端直徑。
　　 2.灌注前后不同時(shí)間點(diǎn)之間腦溫的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=175.730,P<0.001)。99ml/h和50ml/h兩種速度選擇性冷生理鹽水灌注均能顯著降低腦溫(F值分別為108.926和80.459,均P<0.001)。99ml/h灌注組腦溫下降速度顯著高于50ml/h灌注組(F=27.820,P=0.001),除灌注前,各時(shí)間點(diǎn)99ml

10、/h灌注組腦溫均顯著低于50ml/h灌注組(均P<0.01)。灌注前后各時(shí)間點(diǎn)與不同灌注速度之間存在交互效應(yīng)(F=31.866,P<0.001)。綜合灌注組選擇性冷生理鹽水灌注前后不同時(shí)間點(diǎn)之間腦溫的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=206.462,P<0.001),灌注后腦溫隨灌注時(shí)間顯著下降(F=199.366,P<0.001)。各時(shí)間點(diǎn)腦溫均顯著低于肛溫(F=546.385,P<0.001),灌注前后各時(shí)間點(diǎn)與不同部位之間存在交互效應(yīng)(F=1

11、74.153,P<0.001)。灌注過(guò)程中肛溫隨灌注時(shí)間顯著下降(F=19.608,P<0.001),但始終維持在正常水平(38-40℃)。在選擇性冷生理鹽水灌注過(guò)程中腦溫與肛溫?zé)o相關(guān)關(guān)系(r=0.607,P=0.111)。灌注前后各時(shí)間點(diǎn)之間心率、平均動(dòng)脈壓、血細(xì)胞比積、鈉離子濃度及血?dú)庵笜?biāo)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),腦溫與各指標(biāo)之間均無(wú)相關(guān)關(guān)系(均P>0.05)。綜合灌注組術(shù)后48hmNNS均為0分,無(wú)神經(jīng)功能損傷表現(xiàn)。

12、灌注側(cè)各層面大腦切片TTC染色均未見(jiàn)缺血灶,組織大體結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常,與未灌注側(cè)對(duì)稱。HE染色細(xì)胞形態(tài)正常,未見(jiàn)血管內(nèi)皮損傷及血管周圍間隙增大,未見(jiàn)細(xì)胞水腫。
　　 3.各組之間的基線資料均衡(均P>0.05)。MCAO前后不同時(shí)間之間顱內(nèi)壓的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=85.003,P<0.001)；各組之間顱內(nèi)壓的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.891,P=0.001),從各時(shí)間點(diǎn)看,在選擇性冷生理鹽水灌注后(MCAO后3h)的各時(shí)間點(diǎn),

13、各組之間顱內(nèi)壓的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。MCAO前后不同時(shí)間之間腦灌注壓的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=36.048,P<0.001)。各組相對(duì)梗死體積之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.241,P<0.001.),I2組相對(duì)梗死體積顯著低于其余各組(均P<0.05),同時(shí)顯著低于估計(jì)梗死體積(t=-3.162,P=0.007)。各組水腫指數(shù)之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.181,P=0.015),I2組水腫指數(shù)顯著低于M組和I3組(

14、均P<0.05)。各組24h和48hmNSS之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為4.087,6.701；P值分別為0.016,0.002),其中I2組評(píng)分在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)均最低,48h評(píng)分顯著低于其余各組(均P<0.05)。各組NSE、S-100β、MMP-9之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為5.806,4.749,3.789；P值分別為0.003,0.008,0.021),I1組、I2組三種指標(biāo)與M組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)

15、。I1組、I2組NSE與I3組的差異分別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.建立了標(biāo)準(zhǔn)化的兔線栓法MCAO模型,其穩(wěn)定性高,可重復(fù)性好。
　　 2.在固定線栓頭端直徑(0.5-0.6mm)的前提下,動(dòng)物體重、線栓置入深度均能影響MCAO造模成功率及腦梗死體積。體重≥2.5kg,線栓置入深度在5.5-6.0cm之間,模型成功率最高。
　　 3.aEEG上界、下界及帶寬顯著降低提示MCA

16、O模型成功,病灶累及皮層。
　　 4.MCAO模型病灶累及皮層時(shí),α、β、θ波ABP較術(shù)前顯著減小。
　　 5.aEEG上界、下界及帶寬降幅與相對(duì)梗死體積均呈正相關(guān),回歸方程均有顯著性意義,可以根據(jù)aEEG降幅估計(jì)相對(duì)梗死體積。
　　 6.aEEG上界、下界及帶寬降幅對(duì)皮層梗死的診斷價(jià)值均較高,均具有較高的靈敏度和特異度,可根據(jù)aEEG改變篩選MCAO模型成功的動(dòng)物。
　　 7.mNSS一致性和可信性高,

17、與相對(duì)梗死體積呈正相關(guān)關(guān)系。
　　 8.血管內(nèi)選擇性冷生理鹽水灌注能迅速降低腦溫,同時(shí)保持肛溫、心率、平均動(dòng)脈壓、血細(xì)胞比積、Na離子濃度、血?dú)庵笜?biāo)穩(wěn)定。該方法是一種高效、安全、可重復(fù)性較好的選擇性腦低溫方法。
　　 9.血管內(nèi)選擇性冷生理鹽水灌注60min可顯著降低顱內(nèi)壓,增高腦灌注壓,在急性期起到腦保護(hù)作用。
　　 10.通過(guò)aEEG降幅估算的相對(duì)梗死體積與TTC染色計(jì)算的結(jié)果比較相似,血管內(nèi)選擇性冷生理鹽水