微生物誘導家蠅幼蟲抗菌肽的研究.pdf

1、昆蟲抗菌肽是昆蟲體液免疫中的一類有生物活性的多肽，具有抗菌譜廣、熱穩(wěn)定和不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點，使之有望成為代替抗生素的新型抗菌藥物。家蠅具有很強的抗病能力，存在獨特的免疫機制，對其不同誘導源表達抗菌肽的類型、活性以及抑菌作用動力學尚未見系統(tǒng)的研究報道。本課題采用多種外源微生物針刺法誘導家蠅幼蟲表達抗菌肽，對微生物誘導產(chǎn)物以及純化抗菌蛋白的物化性質和抑菌特性進行研究，并對家蠅抗菌肽的作用機制進行探討。 六種菌分別針刺誘導家蠅幼蟲表

2、達抗菌肽，通過蛋白表達量測定可知不同微生物誘導使產(chǎn)物中蛋白含量增加。利用SephadexG25初步純化后，測定理化穩(wěn)定性，結果表明家蠅抗菌肽具有較好的溫度穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，但活性受離子強度影響較大。通過對不同誘導產(chǎn)物進行毛細管電泳以及SDS-PAGE電泳分析表明，不同誘導產(chǎn)物的組分有差別，部分組分分子量較大，帶有較多的正電荷。 通過對微生物誘導產(chǎn)物的抗菌譜檢測可知不同微生物誘導產(chǎn)物都具有廣譜抑菌活性，其對誘導菌的活性較強。志賀

3、氏菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌和鼠傷寒沙門氏菌誘導產(chǎn)物抑菌活性較好。誘導產(chǎn)物對同一種細菌的最小抑菌濃度(MIC)有差別，MIC都較小?？咕臉悠返幕钚耘c作用時間有關，24h內出現(xiàn)一到兩個活性峰，同一抗菌肽樣品對不同細菌的抑菌動力學有差異，抗菌肽的抑菌動力學機制應該與它的抑菌作用機制有關。 通過抗菌肽樣品對不同細菌動力學特性的研究出發(fā)對抗菌肽抑菌作用機制進行探討。通過電鏡觀測、細胞磷代謝、紫外吸收物測定以及抗菌肽與細菌DNA相互作用

4、結果可知，微生物誘導家蠅表達的抗菌肽樣品不僅能夠造成細菌細胞的快速坍塌破裂而且能夠破壞細胞內部結構，與DNA結合作用。抗菌肽抑菌動力學的解釋：微生物誘導產(chǎn)物中含有兩類抗菌肽，一類抗菌肽能造成細胞膜的快速坍塌破裂形成第一個活性峰；另一類抗菌肽可進入細胞，破壞細胞核心，造成紫外吸收物大量外泄形成第二個活性峰。 利用高效液相色譜分離志賀氏菌誘導產(chǎn)物，得到一條61kDa的抗菌蛋白，將之命名為S1。對S1的理化穩(wěn)定性以及抑菌特性進行研究，