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1、徐州醫(yī)學院碩士學位論文LDRqPCR法檢測乳腺癌細胞miRNA122a的表達及其與雌激素調(diào)控的關(guān)系姓名:惲文申請學位級別:碩士專業(yè):外科學(普外)指導教師:唐金海201203徐州醫(yī)學院碩士學位論文LigaseDependentReaction—qPCRDetectiveMethodformiR122aExpression:ItsDevelopmentandApplicationinEstrogenRegulationinMCF一7Cel
2、lsAbsnactObjectiveIncreasingevidencesshowthatmutationanddifferentialexpressionofsomespecificmiRNAsareassociatedwiththeformationandprogressofmanytypesofcancersButmiRNAsaredifficulttodetectduetotheirsmallsizes(about20nt)We
3、establishedaligasedependentreactionqPCRmethodfordetectingmiR122a,andinvestigatedthetheinfluenceofestrogenonmiR122aexpressioninMCF7cellsWiththismethodMethodsWedevelopedanassaythroughthecombinationofenzymaticprobeligationa
4、ndrealtimePCRamplificationforthemeasurementofmaturemiR122ainbreastcancercelllineMCF一7,aswellasthemeasurementofU6snRNAasanendogenouscontr01Inaddition,thecharactersofdetectionperformanceofthemethodwereevaluated,andthemetho
5、dwasappliedtostudytherelativitybetweenmiR一122aexpressionandestrogenlevelsinMCF7cellsResultsTheLDR@CRproductswereconfirmedbymeltingcurve,andagarosegelelectrophoresis,andthecoefficientofvariationislowerthan10%TheLDR。qPCRis
6、littlemoresensitivethanstemloopqPCRassayby1dillution,withdetectionlimitoftotalRNAsamplesbeing5pg/ul(50pg/plbystemloopqPCR)LevelsofmiR122aincreasedapproximately365foldinestrogenstarvationcells,anddecreasedbytheadditionofe
7、stradiol1713in5mol/L(P20040)ConclusionsTheLDRqPCRmethodhasbeendevelopedsuccessfullywithsatisfactoryassayspecificity,variabilityandhighsensitivityAlso,analysisofMCF7cellsrevealedthattheexpressionoffunctionalmiR122isregula
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