苗藥金鐵鎖藥材和植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的皂苷類物質(zhì)含量和成分比較.pdf

1、金鐵鎖(Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu)為石竹科金鐵鎖屬植物，是我國西南苗族、彝族地區(qū)特有的藥用植物。金鐵鎖主要以根入藥，臨床上常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。金鐵鎖主要化學(xué)成分是三萜、三萜皂苷、環(huán)肽以及內(nèi)酰胺。藥理試驗表明，金鐵鎖總皂苷鎮(zhèn)痛和抗炎效果明顯。近年來由于金鐵鎖的市場需求不斷增加，野生植物資源數(shù)量急劇下降，已成為珍稀瀕危物種。本研究以金鐵鎖為對象，建立了金鐵鎖總皂苷的含量測定

2、方法，并從金鐵鎖總皂苷中分離出一個皂苷類單體;利用植物細胞培養(yǎng)技術(shù)建立了金鐵鎖愈傷組織和毛狀根培養(yǎng)體系，并對金鐵鎖藥材、愈傷組織、毛狀根中的總皂苷含量進行了對比;對金鐵鎖藥材和植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的皂苷類成分進行了對比研究。這對于進一步優(yōu)化植物細胞培養(yǎng)的條件和參數(shù)，構(gòu)建高產(chǎn)細胞系，實現(xiàn)金鐵鎖植物細胞規(guī)模化培養(yǎng)生產(chǎn)毛狀根替代金鐵鎖原植物入藥具有重要指導(dǎo)意義。
　　本研究以金鐵鎖植株幼嫩莖為外植體，誘導(dǎo)成功金鐵鎖愈傷組織，并建立了光照和暗

3、培養(yǎng)條件下的金鐵鎖愈傷組織培養(yǎng)體系;利用發(fā)根農(nóng)桿菌ACCC10060誘導(dǎo)金鐵鎖無菌苗產(chǎn)生毛狀根，篩選出具有自主生長且抗卡那霉素特性的轉(zhuǎn)化毛狀根，建立了金鐵鎖毛狀根培養(yǎng)體系;觀察研究植物組織生長狀況，明確了愈傷組織和毛狀根的生長周期。
　　本研究采用紫外分光光度法建立了金鐵鎖總皂苷的含量測定方法，測定結(jié)果顯示:金鐵鎖藥材，愈傷組織1，愈傷組織2和毛狀根中總皂苷的含量分別為0.217％，0.388％，0.221％和0.857％，總皂苷

4、含量的大小順序為:金鐵鎖毛狀根＞金鐵鎖愈傷組織1＞金鐵鎖愈傷組織2＞金鐵鎖藥材。特別是金鐵鎖毛狀根中總皂苷的含量是金鐵鎖藥材中總皂苷含量的近4倍。
　　本研究采用高效液相色譜法對金鐵鎖藥材和植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的皂苷類成分的種類和含量進行了對比分析，結(jié)果顯示:金鐵鎖藥材、愈傷組織1、愈傷組織2、毛狀根皂苷色譜圖中均出現(xiàn)三個保留時間相同而且吸收較強的峰，因此可以判斷出金鐵鎖藥材和植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的總皂苷均含有這三類成分，而且成分含量較高