版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、導致椎間盤退變的因素很多,而椎間盤的營養(yǎng)供應減少是其中的因素之一。椎間盤是人體最大的無血管組織,營養(yǎng)供應相對缺乏。椎間盤營養(yǎng)通過軟骨終板和纖維環(huán)這兩條途徑擴散入椎間盤內(nèi),而椎間盤內(nèi)髓核細胞的營養(yǎng)主要通過終板途徑獲得營養(yǎng)。隨著年齡逐漸增加,軟骨終板逐漸變薄、鈣化,軟骨終板的血管數(shù)量也就逐漸減少。髓核細胞營養(yǎng)供應相對缺乏,從而導致髓核細胞數(shù)量減少,最終導致椎間盤退變。葡萄糖是椎間盤髓核細胞的營養(yǎng)成分之一,葡萄糖是通過糖酵解的方式向椎間盤提供
2、能量的,故椎間盤需要消耗大量的葡萄糖。在椎間盤軟骨終板鈣化的情況下,軟骨終板限制了葡萄糖的通過,導致椎間盤髓核內(nèi)葡萄糖濃度降低,進而導致髓核細胞活性降低和凋亡增加。本實驗目的旨在研究低濃度葡萄糖對體外培養(yǎng)髓核細胞形態(tài)、生長及凋亡的影響,為椎間盤退變的病因?qū)W研究提供依據(jù)。
一、人椎間盤髓核細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
人髓核組織取自脊柱側(cè)彎矯形手術(shù)患者,年齡在10-15歲,術(shù)前MRI檢查證實椎間盤信號與正常椎間盤信號一致。所
3、取標本在超凈臺上仔細分離出韌帶、纖維環(huán)和軟骨終板,剪碎髓核組織。0.25%的胰蛋白酶消化約40min。0.2%Ⅰ型膠原酶和0.2%Ⅱ型膠原酶混勻消化約3h,待髓核組織變成絮狀物質(zhì)后,用DF12+10%FBS終止消化。離心,去除組織殘渣,加入DF12+15%FBS培養(yǎng)液。細胞接種于培養(yǎng)瓶中,放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中觀察細胞形態(tài)學變化;MTT法繪制細胞生長曲線;甲苯胺藍染色觀察細胞形態(tài);GAG和Ⅱ型膠原免疫組化染色鑒定細胞表型。結(jié)果:
4、GAG染色和Ⅱ型膠原染色對細胞進行鑒定所得細胞為髓核細胞,甲苯胺藍染色觀察細胞形態(tài)正常,MTT法繪制生長曲線顯示細胞生長良好。結(jié)論:胰蛋白酶、Ⅰ型膠原酶和Ⅱ型膠原酶混合培養(yǎng)法所得髓核細胞形態(tài)正常,細胞生長良好,表型表達為髓核細胞,滿足椎間盤體外實驗研究。
二、不同葡萄糖濃度的細胞培養(yǎng)液對體外培養(yǎng)椎間盤髓核細胞形態(tài)、生長和凋亡的作用
實驗中的髓核細胞為實驗一中培養(yǎng)的細胞。實驗分為四組:加入葡萄糖濃度為5mmol/L的培
5、養(yǎng)液組(對照組);加入葡萄糖濃度為2.5mmol/L的培養(yǎng)液組;加入葡萄糖濃度為1mmol/L的培養(yǎng)液組;加入葡萄糖濃度為0mmol/L的培養(yǎng)液組。MTT法繪制生長曲線;培養(yǎng)48h和72h后,相差顯微鏡觀察髓核細胞形態(tài)變化;透射電鏡下觀察細胞超微結(jié)構(gòu)變化;流式細胞儀檢測細胞凋亡率。結(jié)果可以看到,隨著培養(yǎng)液中葡萄糖濃度的不斷降低,細胞數(shù)量也逐漸減少。這說明過低的葡萄糖濃度細胞培養(yǎng)液可抑制髓核細胞的增殖。對照組中,細胞呈多角形或短梭形。超微
6、結(jié)構(gòu)顯示,細胞核為橢圓形,核膜完整,有1-3個大小不等的核仁。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張,線粒體結(jié)構(gòu)正常。在2.5mmol/L組、1mmol/L組、0mmol/L組中,倒置顯微鏡下均可見到大量的長梭形細胞,胞質(zhì)減少,折光性減弱等細胞衰老跡象。2.5mmol/L組、1mmol/L組中,透射電鏡可觀察到髓核細胞內(nèi)大量溶酶體和脂肪滴,濃縮的核染色質(zhì)邊聚。0mmol/L中,透射電鏡觀察細胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)變化為,胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)目明顯減少,細胞器破壞,胞膜
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 高糖對大鼠椎間盤基質(zhì)代謝和髓核細胞凋亡的影響.pdf
- 體外兔髓核細胞培養(yǎng)及hIGF-1對兔椎間盤髓核細胞凋亡的影響.pdf
- 不同濃度葡萄糖對體外培養(yǎng)小鼠成纖維細胞功能的影響.pdf
- 不同濃度葡萄糖對體外培養(yǎng)小鼠胰島細胞IRS-2表達的影響.pdf
- PeroxiredoxionⅡ?qū)w外培養(yǎng)人退變腰椎間盤髓核細胞的抑制作用.pdf
- 高濃度葡萄糖對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞及其ILK表達的影響.pdf
- 不同葡萄糖濃度在體外影響卵巢癌細胞生長與代謝的機制研究.pdf
- 肉桂對脂肪細胞和葡萄糖的影響.pdf
- 兔髓核細胞的體外培養(yǎng)及髓核細胞移植抑制椎間盤退變的實驗研究.pdf
- 不同濃度葡萄糖與葡萄糖波動對大鼠腎系膜細胞損傷及RAGE表達的影響.pdf
- 高濃度葡萄糖對大鼠胰島β細胞拉曼光譜的影響.pdf
- 不同濃度葡萄糖對肺腺癌細胞PEDF表達的影響.pdf
- 不同濃度葡萄糖刺激對原代培養(yǎng)β細胞胞內(nèi)鈣和胰島素分泌的影響.pdf
- 葡萄糖濃度對大鼠胰腺導管干細胞誘導分化的影響.pdf
- 葡萄糖濃度對子宮內(nèi)膜癌細胞生長的影響及其機制研究.pdf
- 葡萄糖和胰島素對人外周血內(nèi)皮祖細胞凋亡的影響.pdf
- 不同葡萄糖濃度對乳鼠心肌細胞培養(yǎng)中自噬的影響.pdf
- 高濃度葡萄糖對血管內(nèi)皮細胞凋亡的作用及機制研究.pdf
- 葡萄糖和胰島素對鵝肝細胞內(nèi)葡萄糖代謝影響的研究.pdf
- 不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對原代乳鼠心肌細胞影響的研究.pdf
評論
0/150
提交評論