牛精子質(zhì)膜提取及二維電泳分離精子全蛋白的技術(shù)研究.pdf

1、為了尋找X和Y兩種類型精子之間的蛋白差異，利用抗原抗體反應(yīng)分離X、Y精子，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)性別控制，本實(shí)驗(yàn)對(duì)牛精子質(zhì)膜提取及二維電泳分離牛精子全蛋白進(jìn)行了研究。選擇手工玻璃研磨器研磨法結(jié)合氮?dú)鈮毫Ρ品ㄆ扑榫蛹?xì)胞，借助掃描電鏡技術(shù)在3000倍下對(duì)其結(jié)果進(jìn)行分析觀察和驗(yàn)證。 在利用二維電泳技術(shù)分離牛精子全蛋白時(shí)，對(duì)不同的細(xì)胞裂解方法、不同蛋白上樣量、不同膠條長(zhǎng)度的二維電泳結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用尿素一鹽酸胍兩步法裂解精子，使用13c

2、m非線性固相干膠條(pH3～10)，能獲得較好的精子蛋白二維電泳效果。采用ImageMasterTM2DPlatinum軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，可檢測(cè)出約800多個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，分子量基本分布在10～100KD，等電點(diǎn)約為4～9的區(qū)域內(nèi)。切取凝膠圖譜上的2個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行脫色，膠內(nèi)酶解消化以后利用MALDI-TOFMS分析測(cè)定，再通過數(shù)據(jù)庫(kù)查詢鑒定蛋白質(zhì)，結(jié)果表明有1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)獲得了滿意的肽指紋圖譜，搜索到7個(gè)匹配的肽段，覆蓋率為32％，符合蛋白