小兒腎小球疾病尿蛋白二維電泳分析及其應用探討.pdf

1、竺!型壟壟堂絲!堡———————————————堡蘭蘭!墮墾芝小JLt子d、球疾病尿蛋白的二維電泳分析及其應用探討————————————————，—一研究生黃愛霞導師吳衡生摘要f研究背景：正常人尿液中蛋白質A“量甚微，濃度約為血漿蛋白質濃度的014％，僅20—80mg／24h尿。當腎小球濾過屏障發(fā)生病理改變、腎小管重吸收障礙、尿路炎癥以及組織蛋白產生過多時，尿中蛋白質的量和種類可發(fā)生明顯變化。對正常及疾病狀態(tài)下尿蛋白組分進行定性及定量

2、分析不僅可判斷蛋白尿的來源、疾病的嚴重程度，還有助于發(fā)現(xiàn)生物標記蛋白用于疾病的診斷和預防、闡述蛋白尿的發(fā)生機制。目前已有報道將二維電泳技術用于分析腎細胞癌、膀胱癌及腎中毒等疾病尿蛋白并發(fā)現(xiàn)了～些生物標記蛋白““，但有關小兒原發(fā)性腎病綜合征、腎小球腎炎尿蛋白分析的報道不多。廠4目的：1建立和優(yōu)化用于dJ1腎臟疾病尿蛋白研究的方法系統(tǒng)，并探討其在臨床上的應用。2比較幾種小兒常見的腎小球疾病尿蛋白二維電泳圖譜的差異，探求特異性生物標志蛋白。方

3、法：收集2001年1月至2002年1月間入住同濟醫(yī)院兒科系病房的腎小球疾病患兒晨尿標本93份，離心后分別進行SDS垂直平板電泳和二維電泳分離尿可溶性蛋白，銀染顯色，利用掃描儀對凝膠掃描，通過melanie30軟件進行蛋白斑點檢測和配比及Bandscan軟件進行蛋白條帶的識別。rl結果：1尿蛋白SDS垂直平板電泳圖譜顯示不同分子量蛋白組分分離及重復性良L好，并經圖象分析得到各蛋白條帶的相對分子質量及相對蛋白含量。2尿蛋白二維電泳銀染圖譜顯

4、示各斑點間分離清晰，各組內凝膠在蛋白質斑點位置上具有較好的重復性，適合計算機圖象分析。各組凝膠的平均蛋白質點數(shù)分別為10440，4622，3812，4324，3919個，變異率(變異率=差異斑點數(shù)／斑點總數(shù))分別為803％，●蘭蘭型燮蘭旦鱉塑一——————壁絲墼TwodimensionalelectrophoresisanalysisofurineproteinsfromchildrenwithkidneydiseasesPostgra

5、duateHuangAixiaDirectorWuHengshengAbstractBackground：Urineofhealthypeoplecontainsonlytraceproteinswhichisabout014％oftheproteinlevelinplasmaProteinuriaiSproducedasincreasedpermeabilityoftheglomerularcapillarywall，diminish

6、edreabsorptivecapacityoftheproximaltubules，urinetractinfections，orincreasedtissueproteinsexcretionThereforequantitativeandqualitativeanalysisofthemisveryusefulindiseasedignosisTheimportanceofurineproteinstoclinicalanalys

7、isarisesfromthevarietyofsourcesthatproducetheproteinstheirrelationshiptokidneyfunctions，andtheircharacterofservingasbiomarkerproteinsSomebiomarkerproteinsfoundinurineofpatientswithrenalcellcarcinoma，bladdercarcinomaornep

8、hrotoxicityusingtwo—dimensionalelectrophoresishavebeenreportedButtherearefewreportsonurineproteinsanalysisofidiopathicnephriticsyndromeand910merulonephritiSObjective：Toestablishandoptimizetheresearchmethodsforurineprotei

9、nsofkidneydisensesandelucidateapplicationofwhichinclinic；comparethedifferenceamongseveral2D—PAGEimagesofdifferentkidneydiseasestofindoutbiomarkerfordisensesdiagnosiSMethods：Aseriesofmethodsincludingtwo—dimensionalelectro