小兒腎小球疾病尿蛋白二維電泳分析及其應(yīng)用探討.pdf

1、竺!型壟壟堂絲!堡———————————————堡蘭蘭!墮墾芝小JLt子d、球疾病尿蛋白的二維電泳分析及其應(yīng)用探討————————————————，—一研究生黃愛霞導(dǎo)師吳衡生摘要f研究背景：正常人尿液中蛋白質(zhì)A“量甚微，濃度約為血漿蛋白質(zhì)濃度的014％，僅20—80mg／24h尿。當(dāng)腎小球濾過屏障發(fā)生病理改變、腎小管重吸收障礙、尿路炎癥以及組織蛋白產(chǎn)生過多時，尿中蛋白質(zhì)的量和種類可發(fā)生明顯變化。對正常及疾病狀態(tài)下尿蛋白組分進(jìn)行定性及定量

2、分析不僅可判斷蛋白尿的來源、疾病的嚴(yán)重程度，還有助于發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記蛋白用于疾病的診斷和預(yù)防、闡述蛋白尿的發(fā)生機(jī)制。目前已有報道將二維電泳技術(shù)用于分析腎細(xì)胞癌、膀胱癌及腎中毒等疾病尿蛋白并發(fā)現(xiàn)了～些生物標(biāo)記蛋白““，但有關(guān)小兒原發(fā)性腎病綜合征、腎小球腎炎尿蛋白分析的報道不多。廠4目的：1建立和優(yōu)化用于dJ1腎臟疾病尿蛋白研究的方法系統(tǒng)，并探討其在臨床上的應(yīng)用。2比較幾種小兒常見的腎小球疾病尿蛋白二維電泳圖譜的差異，探求特異性生物標(biāo)志蛋白。方

3、法：收集2001年1月至2002年1月間入住同濟(jì)醫(yī)院兒科系病房的腎小球疾病患兒晨尿標(biāo)本93份，離心后分別進(jìn)行SDS垂直平板電泳和二維電泳分離尿可溶性蛋白，銀染顯色，利用掃描儀對凝膠掃描，通過melanie30軟件進(jìn)行蛋白斑點檢測和配比及Bandscan軟件進(jìn)行蛋白條帶的識別。rl結(jié)果：1尿蛋白SDS垂直平板電泳圖譜顯示不同分子量蛋白組分分離及重復(fù)性良L好，并經(jīng)圖象分析得到各蛋白條帶的相對分子質(zhì)量及相對蛋白含量。2尿蛋白二維電泳銀染圖譜顯

4、示各斑點間分離清晰，各組內(nèi)凝膠在蛋白質(zhì)斑點位置上具有較好的重復(fù)性，適合計算機(jī)圖象分析。各組凝膠的平均蛋白質(zhì)點數(shù)分別為10440，4622，3812，4324，3919個，變異率(變異率=差異斑點數(shù)／斑點總數(shù))分別為803％，●蘭蘭型燮蘭旦鱉塑一——————壁絲墼TwodimensionalelectrophoresisanalysisofurineproteinsfromchildrenwithkidneydiseasesPostgra

5、duateHuangAixiaDirectorWuHengshengAbstractBackground：Urineofhealthypeoplecontainsonlytraceproteinswhichisabout014％oftheproteinlevelinplasmaProteinuriaiSproducedasincreasedpermeabilityoftheglomerularcapillarywall，diminish

6、edreabsorptivecapacityoftheproximaltubules，urinetractinfections，orincreasedtissueproteinsexcretionThereforequantitativeandqualitativeanalysisofthemisveryusefulindiseasedignosisTheimportanceofurineproteinstoclinicalanalys

7、isarisesfromthevarietyofsourcesthatproducetheproteinstheirrelationshiptokidneyfunctions，andtheircharacterofservingasbiomarkerproteinsSomebiomarkerproteinsfoundinurineofpatientswithrenalcellcarcinoma，bladdercarcinomaornep

8、hrotoxicityusingtwo—dimensionalelectrophoresishavebeenreportedButtherearefewreportsonurineproteinsanalysisofidiopathicnephriticsyndromeand910merulonephritiSObjective：Toestablishandoptimizetheresearchmethodsforurineprotei

9、nsofkidneydisensesandelucidateapplicationofwhichinclinic；comparethedifferenceamongseveral2D—PAGEimagesofdifferentkidneydiseasestofindoutbiomarkerfordisensesdiagnosiSMethods：Aseriesofmethodsincludingtwo—dimensionalelectro