辛伐他汀抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌成纖細(xì)胞膠原合成的機(jī)制研究.pdf

1、目的：心肌纖維化的主要病理過程包括心肌成纖維細(xì)胞(Cardiac fibroblasts)增殖、Ⅰ型膠原(Collage type Ⅰ)及Ⅲ 型膠原(Collage type Ⅲ)合成增加和細(xì)胞外基質(zhì)的無序沉積。心肌成纖維細(xì)胞在心肌纖維化的形成過程中起了至關(guān)重要的作用。血管緊張素II(Angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能具有重要影響可以促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖及表型轉(zhuǎn)化，刺激心肌成纖維細(xì)胞合成和分泌多種細(xì)

2、胞因子如骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)和整合蛋白（B3 integrin），促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子NF-Κb(Nuclear factor-Κb)和AP-1(activator protien-1)的活化。3 羥基－3 甲基－戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶抑制劑又稱他汀類藥物如辛伐他汀(Simvastatin ,Sim)，具有良好的治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用

3、，大系列臨床研究發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物也能降低血脂水平正?；颊叩男难苁录陌l(fā)生率，它對(duì)冠心病合并心力衰竭患者的保護(hù)作用，特別是抗纖維化的作用引起醫(yī)學(xué)界的高度關(guān)注。近年來研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物可以改善AngⅡ 導(dǎo)致的心肌肥大、心肌纖維化等心肌重構(gòu)作用，且不依賴于血脂的降低。在體外試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)HMG-CoA 還原酶抑制劑阿托伐他汀可以直接抑制心肌成纖維細(xì)胞的增殖及膠原的合成。但是其中的分子機(jī)制未被闡明。本研究以心肌成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象，探討辛伐他汀的

4、以下作用：對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化的影響；對(duì)核轉(zhuǎn)錄因子的活化合成的影響；對(duì)骨橋蛋白和整合蛋白表達(dá)的影響。試圖進(jìn)一步闡明辛伐他汀抑制膠原合成的機(jī)制，為防治心肌纖維化提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：原代心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，第3-5代心肌成纖維細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。分為AngⅡ組(AngⅡ 10-7mol/L)；空白對(duì)照組；小劑量Sim 組(Sim10-7mol/L+AngⅡ10-7mol/L)；中劑量Sim 組(Sim10-6mo

5、l/L+AngⅡ10-7mol/L)；大劑量Sim 組(Sim10-5mol/L+AngⅡ10-7mol/L)。MTT 法測(cè)定細(xì)胞增殖水平，細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)、B3 整合蛋白、骨橋蛋白、Ⅰ 型膠原和Ⅲ 型膠原在胞漿中的表達(dá)及NF-Κb P50 與AP-1-C-Jun 亞基在胞漿合胞核中核轉(zhuǎn)移過程。Western blot 定量分析骨橋蛋白、NF-Κb-P50 亞基和

6、AP-1-C-Jun 亞基的蛋白合成情況。
　　 結(jié)果：⑴AngⅡ促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞合成I型膠原（P<0.01）和Ⅲ型膠原（P<0.01），誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞的增殖及表型轉(zhuǎn)化；大，中，小劑量辛伐他汀均能不同程度的抑制AngⅡ促進(jìn)的I型膠原（P<0.01）和Ⅲ型膠原（P<0.01）的合成，并且隨著辛伐他汀濃度的增加其對(duì)Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原表達(dá)的抑制程度有增強(qiáng)的趨勢(shì)。大，中，小劑量辛伐他汀均能抑制AngⅡ促進(jìn)的心肌成纖維細(xì)胞增殖及表型

7、轉(zhuǎn)化。⑵AngⅡ 促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞合成骨橋蛋白(P<0.05)及B3整合蛋白(P<0.01)。大劑量及中劑量的辛伐他汀能不同程度的抑制心肌成纖維細(xì)胞合成骨橋蛋白(P<0.01)；大，中，小劑量辛伐他汀均能抑制AngⅡ促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞合成B3整合蛋白(P<0.01)。⑶大，中，小劑量辛伐他汀不同程度抑制AngⅡ促進(jìn)的NF-Κb-P50亞基蛋白合成(P<0.01)和AP-1-C-Jun亞基的蛋白合成(P<0.01)。⑷AngⅡ促進(jìn)NF-

8、Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，小劑量辛伐他汀阻礙了NF-Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基的核轉(zhuǎn)位，大劑量辛伐他汀抑制了NF-Κb-P50亞基及AP-1-C-Jun亞基在胞核及胞漿中的表達(dá)。
　　 結(jié)論：辛伐他汀能夠抑制心肌成纖維細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化、增殖從而抑制了Ⅰ 型膠原和Ⅲ 型膠原合成。其機(jī)制可能與辛伐他汀抑制了骨橋蛋白和B3整合蛋白的合成，抑制了核轉(zhuǎn)錄因子NF-Κb和AP-1 活化及合