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文檔簡介
1、研究背景
心肌細(xì)胞損傷后不能再生,以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞治療有望修復(fù)損傷心肌。在心肌梗死后干細(xì)胞治療中細(xì)胞來源與評價一直是該領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。近年來,采用羊膜間充質(zhì)細(xì)胞(Amniotic Membrane-human Mesenchymal Stromal Cells,AM-hMSCs)進(jìn)行干細(xì)胞治療受到關(guān)注,這些看似有應(yīng)用前景的細(xì)胞在體外誘導(dǎo)分化后是否具有心肌細(xì)胞的電生理特點(diǎn)仍缺乏研究。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>
2、1.明確在誘導(dǎo)分化前,AM-hMSCs上表面離子電流的分布特征以及相應(yīng)離子通道蛋白表達(dá)。
2.在心肌裂解液誘導(dǎo)作用下,AM-hMSCs在誘導(dǎo)分化過程中,細(xì)胞表面離子通道的變化情況。
實(shí)驗(yàn)方法
取羊膜組織,經(jīng)膠原酶消化,獲得AM-hMSCs。根據(jù)不同培養(yǎng)條件,將AM-hMSCs分為對照組以及心肌裂解液誘導(dǎo)組。
采用RT-PCR方法檢測兩組細(xì)胞離子通道蛋白mRNA的表達(dá)。通過膜片鉗技術(shù)
3、,記錄細(xì)胞表面離子電流。比較兩組細(xì)胞離子電流分布和離子通道蛋白mRNA表達(dá)的差異。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在誘導(dǎo)分化前的AM-hMSCs中,共可記錄到三種外向電流,其中外向延遲整流鉀電流(IkDR)占90%,鈣激活鉀電流(IkCa)占43.3%,瞬時外向電流(Ito)占16.7%。實(shí)驗(yàn)中沒有記錄到內(nèi)向電流。
經(jīng)心肌裂解液誘導(dǎo)培養(yǎng)后,AM-hMSCs上Ito電流明顯增加(誘導(dǎo)前16.7%與誘導(dǎo)后30.7%,p
4、=0.04),并且有8%的細(xì)胞上可以記錄到超極化激活的陽離子流(funny current,If)。
對離子通道m(xù)RNA的研究顯示,在誘導(dǎo)分化前的AM-hMSCs上可以檢測到一定水平的MaxIK,Kir2.1,Kvl.4,HminK通道蛋白mRNA的表達(dá)。經(jīng)心肌裂解液誘導(dǎo)分化后,介導(dǎo)If電流的HCN2通道蛋白可表達(dá)陽性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
本研究首次證實(shí)在誘導(dǎo)前的AM-hMSC上存在三種個不同的外向離子
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