地黃花葉病毒（ReMV）移動蛋白（MP）和外殼蛋白（CP）基因介導(dǎo)的抗病性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、以含地黃花葉病毒(ReMV)移動蛋白(MP)基因全長cDNA的質(zhì)粒pTMPF為模板，利用PCR方法，對ReMVMP基因進(jìn)行缺失改造，分別獲得了5'端缺失600nt(1/4MP)、400nt(1/2MP)和200nt(3/4MP)的缺失型MP基因。通過中間載體pROK219，將上述三種缺失型MP基因克隆到雙元植物表達(dá)載體pBIN19上，構(gòu)建了ReMVMP基因3種不同形式的植物表達(dá)載體pBMP202，pBMP406和pBMP603。利用直接

2、凍融轉(zhuǎn)化法將上述3種植物表達(dá)載體和本實(shí)驗(yàn)室已有的ReMV全長MP基因(pBMPF)、5'端缺失18ntMP基因(pBMPD)以及ReMV外殼蛋白(CP)基因的植物表達(dá)載體(pBinCP)轉(zhuǎn)入土壤農(nóng)桿菌LBA4404中。然后，在土壤農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)下轉(zhuǎn)化煙草品種“云煙87”，獲得了所有6種植物表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因植株，并對其分別進(jìn)行了初步的PCR檢測和抗病性鑒定。對R0代轉(zhuǎn)基因植株的初步抗病性分析發(fā)現(xiàn)，不同形式MP基因的轉(zhuǎn)基因植株對煙

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