人SATB1基因啟動子的克隆及其在髓系細胞分化過程中的活性.pdf

1、該文主要是通過構(gòu)建報告載體初步確定了SATB1的啟動子序列,并通過報告載體觀察ATRA及氯化鈷(cobalt chloride,CoCl<,2>)模擬的缺氧環(huán)境誘導髓系細胞分化的過程中是否通過其啟動子下調(diào)SATB1的表達.該研究的第一部分,首先克隆了2946bp長度的SATB1基因5'非編碼區(qū)片段,在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了三個含不同長度SATB1啟動子的螢光素酶報告載體pGL3-SP2946-luc,pGL3-SP1718-luc和pGL3-S

2、P751-luc,瞬時轉(zhuǎn)染Jurkat T,K562,U937和Hela細胞,通過測定螢光素酶的表達活性,觀察到SATB1啟動子在不同細胞內(nèi)活性的差異,以pGL3-SP751-luc的啟動子活性(48hr)為例,在Jurkat T和U-937細胞內(nèi)的活性水平相對較高,在K-562細胞內(nèi)的活性水平相對較低,而在Hela細胞中基本沒有表達,pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc在四種細胞中的啟動子活性同樣存在差異.不

3、同長度的SATB1啟動子活性也存在差異,pGL3-SP751-luc在U937,Jurkat T和K562細胞中的活性均高于pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc,且與后兩者在三種細胞中活性較低的情況不同,一直保持著比較高的活性水平,而三者在Hela細胞中都基本上沒有表達,提示SATB1的核心啟動子可能存在于-751至-9bp區(qū)域中.根據(jù)文獻報道,在白血病的誘導分化治療中,ATRA和CoCl<,2>可以誘導髓系細

4、胞U937分化<'[19-20]>,我們以前的研究結(jié)果顯示,ATRA可以下調(diào)U937中SATB1的表達<'[18]>.該研究的第二部分,首先利用半定量RT-PCR初步觀察到CoCl<,2>可以在mRNA水平降低U-937細胞內(nèi)SATB1的表達,在此基礎(chǔ)上分別觀察了ATRA和CoCl<,2>誘導的髓系細胞U-937分化對SATB1基因啟動子螢光素酶報告載體pGL3-SP751-luc活性的影響,結(jié)果顯示pGL3-SP751-luc的活性均

5、出現(xiàn)下調(diào),并呈現(xiàn)一定的劑量和時間依賴效應,提示ATRA和CoCl<,2>在誘導髓系細胞U937的分化中下調(diào)SATB1的表達,可能是通過其啟動子產(chǎn)生下調(diào)效應.該研究初步探索了SATB1基因的啟動子序列,SATB1啟動子在不同細胞中活性的差異和髓系細胞分化對SATB1啟動子活性的影響,為進一步詳細研究SATB1的核心啟動子,調(diào)控區(qū)中的順式作用元件和與之發(fā)生相互作用的反式作用因子,及最終闡明SATB1基因的表達調(diào)控和其參與髓系細胞分化的具體機