非小細胞肺癌中EGFR基因狀態(tài)與CAR表達之間關系的研究.pdf

1、目的：以人類非小細胞肺癌為研究對象，檢測CAR在EGFR突變型和EGFR野生型樣本中的表達情況，比較二者間的差異，著重探討EGFR基因突變與CAR在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的關系。分析EGFR-TKIs治療EGFR突變型NSCLC的可能機理，為EGFR-TKIs與腺病毒載體共同應用治療腫瘤提供理論依據(jù)。
　　方法：收集新鮮非小細胞肺癌手術標本300例及其對應的正常肺組織(距離瘤組織5cm以上距離的肺組織)。標本收集嚴格按照無菌操作，收集

2、的標本馬上放入液氮中，-80℃保存，同時收集所有患者資料，將完整資料存放待最后分析實驗結果。首先應用實時熒光定量PCR技術檢測EGFR exon19和exon21突變狀態(tài)，然后隨機選取50例為突變組和50例野生組：分別用免疫組織化學和western blot檢測pEGFR、CAR蛋白的表達情況；分析CAR在EGFR突變型和EGFR野生型樣本中的表達情況，探討二者相互關系和作用。
　　結果：
　　1.EGFR基因突變狀態(tài)

3、>　　突變型例數(shù)為102例，野生型者為198例；集中表現(xiàn)在外顯子19和21突變。其中外顯子19突變型者為66例，外顯子21突變者為36例。
　　2.CAR、pEGFR蛋白的表達情況：
　　隨機選取50例突變型和50例野生型分為兩組，免疫組織化學結果顯示：48例(48％)CAR蛋白的表達陽性，其中EGFR突變型者中34例(68％)表達CAR，野生型者中14例(28％)表達CAR。52例p-EGFR蛋白的表達陽性，EGFR突變型

4、者中40例(80％)p-EGFR陽性，野生型者12例(24％)陽性。
　　Western blot方法檢測CAR在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織表達量分別為1.220±0.269，0.891±0.144，pEGFR蛋白在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織表達量分別1.165±0.206，0.922±0.125，CAR和pEGFR蛋白表達差異在EGFR突變型和EGFR野生型肺癌組織間有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，且在各組

5、間均有統(tǒng)計學意義。
　　3.CAR蛋白和pEGFR蛋白的表達與EFGR基因突變具有相關性，EGFR突變的NSCLC中CAR和pEGFR高表達，其差異具有統(tǒng)計學意義P<0.05。CAR蛋白和pEGFR蛋白的表達與EFGR基因突變類型不相關，P>0.05。
　　4.CAR蛋白和pEGFR蛋白在EGFR突變型和野生型肺癌組織中表達的具有相關性二者表達呈顯著正相關(r=0.448，P=0.026)。
　　結論：
　　1.

6、基因突變與p-EGFR表達：EGFR突變集中表現(xiàn)在外顯子19和21，其中外顯子19突變型者多于外顯子21突變者。EGFR基因突變在肺腺癌中發(fā)生率較高，外顯子19的突變率高于外顯子21的突變率。EGFR基因突變在女性非吸煙患者中腺癌高，與性別、吸煙史和病理類型有關。
　　2.應用IHC和Western blot兩種方法檢測CAR和pEGFR在EGFR突變型和野生型非小細胞肺癌患者中的表達，這二者表達不同，即CAR和EGFR蛋白在EG

7、FR突變型和EGFR野生型非小細胞肺癌組織問表達不同。
　　3.EGFR基因突變與p-EGFR表達、CAR表達之間的關系：非小細胞肺癌中CAR的表達與p-EGFR表達呈正相關，并與EGFR基因突變呈正相關性，但與基因突變類型不相關。
　　4.如果CAR表達與EGFR基因突變共同作用于肺癌的形成機制，那么拮抗CAR的抗體有望成為輔助EGFR-TKI的靶向治療藥物。若然不是肺癌形成的促進因子，則肺癌組織中CAR的高表達則有利于腺