基于候選基因的慢性乙型肝炎及SARS的遺傳易感性研究.pdf

1、感染性疾病是世界范圍內(nèi)廣泛存在的發(fā)病率、死亡率較高的疾病之一。目前普遍認(rèn)為，絕大多數(shù)感染性疾病都屬于典型的多基因疾病(復(fù)雜性狀)，是致病微生物和宿主之間在長期的進(jìn)化過程中交互作用的結(jié)果。而宿主的遺傳因素在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著非常重要的作用。乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是我國最嚴(yán)重、最廣泛的傳染病。HBV感染后，個(gè)體間臨床轉(zhuǎn)歸不一，可表現(xiàn)為無癥狀攜帶狀態(tài)、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝癌．宿主遺傳因素可影響HBV感染和疾病進(jìn)程的許多

2、階段。嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征(SARS)是一種新發(fā)的感染性疾病，由一種新近鑒定的冠狀病毒(SARS-CoV)感染引起。其傳染性之強(qiáng)、傳播速度之快、流行范圍之廣、影響范圍之大遠(yuǎn)超出人們的想象。臨床研究表明約有20％的病人發(fā)病特別兇險(xiǎn)，而另外80％的病人病情平穩(wěn)，可以痊愈，即不同個(gè)體間存在發(fā)病嚴(yán)重程度的差異，因此推測宿主的遺傳因素也可能在這一過程中扮演重要角色。本項(xiàng)研究采用基于病例．對照關(guān)聯(lián)研究的策略對上述兩種傳染性疾病的遺傳易感基因進(jìn)行了

3、篩查，希望對揭示疾病的發(fā)病機(jī)理、提高疾病的預(yù)防、診斷和治療水平有一定的指導(dǎo)作用。 在HBV感染的關(guān)聯(lián)研究中，選取了與細(xì)胞免疫反應(yīng)及抗病毒相關(guān)的基因——干擾素-γ(IFN-γ)及寡聚腺苷酸合成酶基因(OAS-1)為候選易感基因，分別研究了存在于IFN-γ基因中的T+874A和OAS-1基因剪接區(qū)的rs1077467l這兩個(gè)功能性多態(tài)性位點(diǎn)與HBV感染易感性及感染后不同臨床轉(zhuǎn)歸之間的相關(guān)性。采用PCR-RFLP的分型方法在病例-對照

4、和核心家系樣本中分別對上述兩個(gè)功能性多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行了分型。入選的病例和對照樣本采自我國北京、泉州和重慶等地區(qū)，包括466例自限恢復(fù)者(SR組)和1434例HBV持續(xù)感染者(PI組)，H組中包括479例無癥狀攜帶者(ASC)，650例慢性乙型肝炎(CHB)和305例肝硬化(LC)患者。入選的293個(gè)核心家系樣本采自重慶地區(qū)，其中165個(gè)為母親乙肝表面抗原陰性家系，剩余128個(gè)家系中母親乙肝表面抗原為陽性。分別采用SPSS9.0統(tǒng)計(jì)軟件和T

5、DT/S-TDT1.1軟件進(jìn)行病例．對照和核心家系數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。 經(jīng)非條件Logistic回歸校正年齡和性別因素后，IFN-γT+874A與OAS-1基因rsl077467l位點(diǎn)等位頻率在PI組(M．核心家系先證者)和SR組間均無顯著差異，核心家系傳遞／不平衡檢驗(yàn)(TDT)分析結(jié)果也顯示與疾病表型無連鎖關(guān)系，提示這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)可能與HBV感染的慢性化表型不存在遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)。進(jìn)一步分別對疾病的嚴(yán)重程度進(jìn)行關(guān)聯(lián)研究，結(jié)果顯示，AS

6、C組中IFN-γT+874A位點(diǎn)T等位的頻率顯著高于CHB和(或)LC組(OR=0.69，95％CI=0.53-0.9l，P=0.007)，而CHB和LC組間差異不顯著：OAS-1，基因剪接區(qū)rs1077467l位點(diǎn)G等位的頻率在LC組中顯著高于ASC和(或)CHB組，而在ASC和CHB組間未發(fā)現(xiàn)顯著差異。按年齡、性別和出生地分別進(jìn)行分層分析，上述關(guān)聯(lián)仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(或臨界值)。上述結(jié)果表明，IFN-γ及OAS-1基因中的功能性多態(tài)性

7、位點(diǎn)均與HBV感染的慢性化不相關(guān)，而可能與HBV感染后疾病進(jìn)程相關(guān)；其中IFN-γT+874A位點(diǎn)可能與肝炎的發(fā)生相關(guān)而與肝纖維化不相關(guān)，且T等位可能起保護(hù)作用，而OAS-1，基因剪接區(qū)的rs1077467l位點(diǎn)可能與肝纖維化相關(guān)，且G等位可能是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)等位。上述結(jié)果具有很強(qiáng)的生物學(xué)依據(jù)。已知IFN-γ可以非溶細(xì)胞的方式抑制HBV的復(fù)制，并且IFN-γ874T等位與IFN吖的高表達(dá)相關(guān)，因此推測攜帶該等位型的個(gè)體將高表達(dá)IFN-γ，進(jìn)而

8、誘發(fā)高水平的免疫反應(yīng)，有效地阻斷HBV的復(fù)制。OAS.1是受干擾素誘導(dǎo)、由雙鏈RNA激活的一種抗病毒酶類，是干擾素抗病毒過程中的關(guān)鍵酶。攜帶OAS-1基因rs1077467l位點(diǎn)G等位的個(gè)體能選擇性的剪接、編碼p46酶類，而使具有細(xì)胞凋亡酶活性的一8或p52酶類的產(chǎn)量降低，進(jìn)而不能引發(fā)正常的細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。 在SARS-CoV感染的遺傳易感性研究中，選取了具有抗病毒作用的基因(IFN-γ、OAS-1及TNF-α)及

9、病毒受體基因(DG-SIGNR)作為候選易感基因，并分析了上述各基因中的功能性多態(tài)性位點(diǎn)與SARS-CoV感染的相關(guān)性。入選的356例SARS病例樣本從小湯山醫(yī)院收集，其中52例為有糖尿病、心血管疾病等共患疾病的病例(PI)、剩余的304例中20例為嚴(yán)重的SARS患者(P2)，其余284例為普通的SARS病例(P3)。對照樣品采自我國北方漢族健康人群(未接種乙肝、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)呈陰性)，共392例。TNF-α啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SN

10、P)采用直接測序法分型，DC-SIGNR基因外顯子4中的69bp串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性位點(diǎn)(VNTR)采用PCR產(chǎn)物直接瓊脂糖凝膠電泳法分型，IFN-γT+87A、OAS-1基因的rs1077467l位點(diǎn)及DG-SIGRN基因外顯子5和內(nèi)含子5中SNP位點(diǎn)均采用PCR-RFLP方法分型。采用SPSS9.O統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 經(jīng)非條件Logistic回歸校正年齡和性別因素，TNF-α啟動子區(qū)-l03l及-863位點(diǎn)的等位型頻率及由5個(gè)

11、SNP位點(diǎn)構(gòu)建的單倍型[CACGG]的頻率在病例和對照中存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。攜帶至少一個(gè)-103lC(T/C和C/C)或-863A(C從和從)等位的個(gè)體其患病風(fēng)險(xiǎn)分別顯著高于攜帶-l03lT/T或一863C/C基因型的個(gè)體(OR=1.47，95％CI=1.07-2.01，P=0.017；OR=1.44，95％CI=1.03-1.99，P=0.033)。單倍型分析顯示，攜帶【CACGq單倍型的個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)顯著高于[TCCGG]單倍型(0

12、R=1.4995％CI=1.11-1.99，P=0.008)。基因-基因交互作用分析顯示，MBL基因的230A等位與刀TNF-α基因的-863A風(fēng)險(xiǎn)等位同時(shí)存在時(shí)，患SARS的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加(OR=2.Ol，95％CI=1.12-3.59，P=0.020)。DC-SIGNR基因外顯子4中的VNTR以及IFN-γ、OAS-1基因多態(tài)性位點(diǎn)的等位及基因型頻率在病例和對照組間均無顯著差別。對S從S嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果顯示各個(gè)基因(位點(diǎn))的等位

13、及基因型頻率在嚴(yán)重病例組及普通病例組間均無顯著差異。上述結(jié)果表明，TNF-α基因啟動子區(qū)SNP位點(diǎn)及單倍型組合可能與SARS-CoV感染的易感性相關(guān)聯(lián)，而DC-SIGNR基因的VNTR以及IFN-γ、OAS-1基因的多態(tài)性位點(diǎn)與S從S.COV感染的易感性不相關(guān)；雖然DC-SIGNR基因VNTR多態(tài)與SARS易感性的關(guān)聯(lián)研究結(jié)果與發(fā)表于NatureGenetics上的香港人群的結(jié)論相悖，但在另一個(gè)獨(dú)立的病例對照人群中得到驗(yàn)證。各個(gè)候選基因

14、的多態(tài)性位點(diǎn)均與SARS的疾病嚴(yán)重程度不相關(guān)。TNF-α多態(tài)性位點(diǎn)與SARS-COV感染的遺傳易感性關(guān)聯(lián)具有生物學(xué)證據(jù)的支持。已知TNF-α是免疫反應(yīng)中極其重要的一種細(xì)胞因子，其功能極其廣泛，包括促炎效應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖等，并且TNF-α還可以直接和間接的抑制許多病毒的復(fù)制。功能研究顯示C．863A多態(tài)性位點(diǎn)處于轉(zhuǎn)錄因子NF-кB的結(jié)合區(qū)域，與-863C等位相比，-863A等位型可能抑制轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，并與TN