柯里拉京對膿毒癥過程中TLR4信號通路的干預(yù)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 柯里拉京在RAW264.7細胞系上對LPS激活的TLR4信號通路的干預(yù)
　　目的:細胞模型上研究柯里拉京對TLR4信號通路的作用及其機制。
　　方法:脂多糖（LPS）刺激RAW264.7細胞造成炎癥模型。予以柯里拉京進行干預(yù)。CCK8法檢測細胞存活率；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6的mRNA的表達水平；Western blot測

2、定各組TLR4信號通路中各信號分子蛋白的表達；ELISA法檢測細胞上清中的IL-1β,IL-6；
　　結(jié)果:1.CCK8法檢測的柯里拉京IC50值是0.25mg/ml;2.柯里拉京干預(yù)后，TLR4信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6的mRNA和蛋白水平，模型組顯著高于正常組(P<0.01)，而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P<0.01)；3.柯里拉京干預(yù)后，TLR4信號通路中產(chǎn)生的促炎因子IL-6,IL-1β，模型

3、組顯著高于正常組(P<0.01)，而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P<0.01)；
　　結(jié)論:在細胞模型上，柯里拉京可通過抑制TLR4信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6的表達，從而抑制促炎因子IL-6,IL-1β的釋放。
　　第二部分 柯里拉京在RAW264.7細胞系上對LPS激活的TLR4-MyD88信號通路的干預(yù)
　　目的:細胞模型上研究柯里拉京對TLR4-MyD88信號通路的作用及其機制。

4、>　　方法:采用小分子RNA干擾技術(shù)沉默TICAM1的表達，脂多糖（LPS）刺激RAW264.7細胞造成炎癥模型。予以柯里拉京進行干預(yù)。實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組TICAM1的表達，及柯里拉京干預(yù)后TLR4,TRAF6,MyD88的mRNA的表達水平；
　　結(jié)果:1.實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測TICAM1siRNA轉(zhuǎn)染細胞后TICAM1 mRNA表達水平，與正常組相比siRNA表達量明顯降低（P＜0.01）;2.柯里拉京干

5、預(yù)后， TLR4-MyD88信號通路中TLR4,MyD88, TRAF6的mRNA模型組顯著高于正常組(P<0.01)，而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P<0.01)；
　　結(jié)論:在細胞模型上，柯里拉京可抑制TLR4-MyD88信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6的表達，
　　第三部分 柯里拉京對膿毒癥小鼠TLR4信號通路的干預(yù)
　　目的:動物模型上研究柯里拉京對TLR4信號通路的作用及其機制。

6、　　方法:脂多糖（LPS）腹腔注射Balb/c雄性小鼠造成膿毒癥模型。予以柯里拉京進行干預(yù)。HE染色檢測小鼠肝，脾，肺，腎，結(jié)腸及腦組織的病理改變；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測各組TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6，HMGB1的mRNA的表達水平；Western blot測定各組TLR4信號通路中各信號分子蛋白的表達；ELISA法檢測細胞上清中的IL-1β, IL-6；
　　結(jié)果:1. HE染色病理切片示，模型組小鼠均有不

7、同程度的病理損傷，而柯里拉京處理組，能一定程度上改善各個臟器的炎癥，壞死，水腫等情況;2.柯里拉京干預(yù)后，TLR4信號通路中TLR4,MyD88,TRIF,TRAF6， HMGB1的mRNA和蛋白水平，模型組顯著高于正常組(P<0.01)，而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P<0.01)；3.柯里拉京干預(yù)后，TLR4信號通路中產(chǎn)生的促炎因子IL-6,IL-1β，模型組顯著高于正常組(P<0.01)，而柯里拉京處理組顯著低于模型組(P<0.