非諾貝特對(duì)嚴(yán)重燙傷小鼠應(yīng)激狀態(tài)下胰島素抵抗的影響.pdf

1、目的:
　　觀察非諾貝特對(duì)嚴(yán)重燙傷小鼠應(yīng)激狀態(tài)下胰島素抵抗的作用。
　　方法:
　　1.燙傷小鼠模型建立與分組選擇健康SPF級(jí)昆明小鼠130只（中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄各半，體質(zhì)量(30±2)g，鼠齡6～8周。自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分成4組，低劑量組(Ⅰ)、高劑量組(Ⅱ)和對(duì)照組(Ⅲ)各40只，正常組10只。燙傷組小鼠背部按30％ TBSA用6％Na2S試劑退毛，腹腔注射4％水

2、合氯醛(40 mg·kg-1)麻醉，麻醉滿意后將小鼠背部置于100℃熱水中燙12s，制成燙傷面積為30％的Ⅲ°燙傷模型（病理切片證實(shí)），燙傷后立即腹腔注射乳酸鈉林格液（40 mg·kg-1）2 mL復(fù)蘇。建模成功后于每日晨8時(shí)Ⅲ組予以0.5 mL·d-1生理鹽水灌胃，Ⅰ、Ⅱ組分別予以30mg·kg-1·d-1、100 mg·kg-1·d-1非諾貝特灌胃。
　　2.血清標(biāo)本的采集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食過(guò)夜，斷頭取血。正常組10只一次性處死，Ⅰ

3、、Ⅱ、Ⅲ組分別于1、3、7、14d各處死10只，所收集血液標(biāo)本2 mL于3000 r/min、20 min、4℃離心，收集血清0.5 mL于-80℃保存待測(cè)。
　　3.空腹血糖(FBG)測(cè)定各組小鼠分別在第1、3、7、14天處死時(shí)用一次性血糖試紙和血糖儀即時(shí)測(cè)量FBG。
　　4.血清胰島素、TNF-α和FFA測(cè)定將制備好的血清從-80℃冰箱中取出，先放入4℃冰箱復(fù)溫24 h，再移至常溫待用。運(yùn)用ELISA試劑盒測(cè)試血清胰島素

4、、TNF-α水平，運(yùn)用比色法檢測(cè)FFA水平。
　　5.穩(wěn)態(tài)模式法(HOMA)計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)值胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FBG(mmol/L)× FIns(mIU/L)/22.5。
　　6.肝組織病理切片制作各組小鼠處死后，迅速切取大小約1.0 cm×1.0cm×0.2 cm肝組織3塊（肝包膜在內(nèi)），置于10％甲醛溶液中固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片，HE染色后，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行肝組織病理學(xué)觀察。
　　7.統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以(x)+s表示，采用單因素方差分析(ANOVA)，兩兩比較采用LSD-t法檢驗(yàn)，雙變量關(guān)聯(lián)性分析采用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1各組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)HOMA-IR值比較正常組小鼠HOMA-IR值為4.03±0.95。燙傷后各組小鼠在第1、3、7天HOMA-IR值均高于正常組，Ⅰ組和Ⅱ組HOMA-IR值均低于Ⅲ組(P＜0.01)

6、，但Ⅰ組和Ⅱ組在同一時(shí)間點(diǎn)均值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。第14天Ⅰ組和Ⅱ組HOMA-IR值接近于正常組，但Ⅲ組HOMA-IR值仍高于正常組。在同一組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)之間均數(shù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且分別與正常組HOMA-IR值比較，亦均存在差異(P＜0.05)。
　　2血清TNF-α水平變化正常組小鼠血清TNF-α水平為(379.40±50.59)pg/mL。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各組小鼠在傷后第1、3、7天血清TNF

7、-α水平均高于正常組，Ⅰ組和Ⅱ組血清TNF-α水平均低于Ⅲ組（P＜0.05或P＜0.01），但Ⅰ組和Ⅱ組在同一時(shí)間點(diǎn)均值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。第14天Ⅰ組和Ⅱ組血清TNF-α水平接近于正常組，但Ⅲ組血清TNF-α水平仍高于正常組。各組不同時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3血清中FFA水平變化正常組小鼠FFA值為(0.38±0.22) mmol/L。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各組小鼠在傷后第1、3天血清FFA水平

8、均高于正常組，Ⅰ組和Ⅱ組血清FFA水平均低于Ⅲ組（P＜0.05或P＜0.01），但Ⅰ組和Ⅱ組在同一時(shí)間點(diǎn)均值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。第7天各組小鼠血清FFA水平仍較高，第14天Ⅰ組和Ⅱ組血清FFA水平接近于正常組，但Ⅲ組血清FFA水平仍高于正常組。各組不同時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4各組燙傷小鼠血清中TNF-α和FFA水平的相關(guān)性選取第3天各組小鼠所測(cè)得的血清TNF-α和FFA值，進(jìn)行相關(guān)性

9、分析，可知相關(guān)系數(shù)均大于0，說(shuō)明兩者存在一定的相關(guān)性，且成正相關(guān)，但P值均大于0.05，說(shuō)明該相關(guān)系數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5燙傷小鼠肝臟病理變化情況正常組小鼠肝細(xì)胞呈正常狀態(tài);燙傷對(duì)照組小鼠鏡下見(jiàn)部分肝細(xì)胞腫脹，界限模糊，胞漿淺染，內(nèi)有大小不等的脂滴并部分融合呈空泡樣，以第3天最為明顯，見(jiàn)圖2;低劑量組小鼠肝細(xì)胞變性明顯輕于對(duì)照組。分析可知燙傷后小鼠肝臟有不同程度的脂肪變性，給予非諾貝特干預(yù)后，肝臟脂肪變性有所改善。
　　結(jié)

10、論:
　　燙傷后各組小鼠在第1、3、7天HOMA-IR值均高于正常組，Ⅰ組和Ⅱ組HOMA-IR值均低于Ⅲ組。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各組小鼠血清TNF-α、FFA水平在傷后不同時(shí)間點(diǎn)均高于正常組，Ⅰ組和Ⅱ組均低于Ⅲ組（P＜0.05或P＜0.01），但Ⅰ組和Ⅱ組在同一時(shí)間點(diǎn)均值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各組不同時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。燙傷后小鼠肝臟有不同程度的脂肪變性，給予諾貝特干預(yù)后，肝臟脂肪變性有所改善。燙傷