鴨疫里氏桿菌溫州分離株的分離、PCR檢測及基因分型研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)為革蘭氏陰性短桿菌,無芽孢,不運動,是引起鴨敗血癥的病原,同時也可以感染家鴨、火雞及多種其他鳥類。呈急性或慢性經(jīng)過,主要病理特征為纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎。由于本病的高死亡率、致鴨體重減輕和高淘汰率,使其成為養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟損失最嚴重的疾病之一。其高致病率和高死亡率被認為是集約化肉鴨養(yǎng)殖的一個主要問題。因此,建立RA的快速檢測和基因分型方法具有重要的意義。
　　

2、 本試驗從浙江省溫州地區(qū)某鴨場送檢疑似鴨疫里氏桿菌病死鴨的腦、心包液、脾及肝中分離到WZ1和WZ2兩株細菌,這兩株細菌進行組織病理學(xué)觀察、菌落形態(tài)觀察、染色鏡檢、生化鑒定及動物回歸實驗,證實分離的兩株細菌為鴨疫里氏桿菌。兩株細菌對新霉素、頭孢孟多、氟嗪酸及壯觀霉素等抗生素敏感。
　　 本研究根據(jù)GenBank中26株鴨疫里氏桿菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,在其高度保守區(qū)設(shè)計了一對特異性引物,成功建立了鴨疫里氏桿菌的快速P

3、CR檢測方法并對18株RA菌株進行擴增,結(jié)果所有的鴨疫里氏桿菌均能擴增出767bp的特異性目的條帶,而鴨源大腸桿菌、鴨源多殺性巴氏桿菌和鴨源沙門氏菌均為陰性。PCR產(chǎn)物經(jīng)測序鑒定證實為RA。最低檢出基因組DNA為1Pg。該方法能從病料組織培養(yǎng)4小時的混合物中快速、準確地檢測到RA,提示該方法可用于RA的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
　　 建立了一種針對RA的Rep-PCR基因分型方法,以提純的RA基因組或者全菌體基因組為模板,進行R

4、ep-PCR擴增。根據(jù)擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖譜,將18株RA區(qū)分為8個不同的基因型,不同血清型的RA圖譜有明顯差異,相同血清型RA的圖譜也存在差異。RA基因組中重復(fù)的基因外回文結(jié)構(gòu)可用于區(qū)別相同血清型的不同分離株。提示Rep-PCR作為一種實用的基因分型方法,在流行病學(xué)研究中可對RA分離株進行基因分型。
　　 總之,本研究所建立的針對RA的PCR檢測方法及Rep-PCR分子分型方法,為在養(yǎng)鴨業(yè)中預(yù)防控制鴨疫里氏桿菌病提供了一