豬IRF3和IRF7基因?qū)LR4信號通路中關(guān)鍵基因表達的影響.pdf

1、I型IFN能抑制多種病毒、細菌、寄生蟲以及細菌和病毒的混合感染，在豬病防治中引起了關(guān)注。IRF3和IRF7在I型IFN的表達和分泌上均發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，二者都能被LPS激活，發(fā)生磷酸化，進而調(diào)節(jié)I型IFN的表達和分泌。目前對IRF3和IRF7的研究主要集中在人和鼠，有關(guān)豬IRF3和IRF7基因功能的研究較少。
　　本文利用PB載體系統(tǒng)構(gòu)建豬IRF3和IRF7基因真核表達載體，轉(zhuǎn)染PK15細胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選，熒光顯微鏡觀察細胞能否

2、發(fā)出綠色熒光，實時定量PCR檢測細胞中IRF3和IRF7基因mRNA表達水平，建立過表達IRF3和IRF7基因的細胞系；LPS和LiCl處理細胞，實時定量PCR檢測TLR4信號通路中關(guān)鍵基因mRNA的表達水平，探討IRF3和IRF7對TLR4介導(dǎo)的信號通路的作用，為進一步揭示IRF3和IRF7在豬病防治中的作用機制提供前期實驗基礎(chǔ)。
　　結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染細胞在熒光顯微鏡下發(fā)出綠色熒光，實時定量PCR結(jié)果顯示，與空載體轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染

3、PB-IRF3和PB-IRF7的細胞中IRF3和IRF7mRNA表達水平顯著升高，差異極顯著（P<0.001），表明IRF3和IRF7基因在PK15細胞中實現(xiàn)了過表達；與空載體轉(zhuǎn)染組相比，IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組細胞中MyD88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達水平高，IL-6mRNA表達水平低，且IRF3轉(zhuǎn)染組中MyD88、TBK1和IL-6mRNA表達差異顯著（P<0.05），IRF7轉(zhuǎn)染組中TRAF6和I

4、FNαmRNA表達差異顯著（P<0.05），其余基因表達差異不顯著；LPS處理后，空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組中上述被檢測基因mRNA表達水平均升高，IRF3轉(zhuǎn)染組中IFNα和IL-6mRNA表達差異顯著（P<0.05），IRF7轉(zhuǎn)染組中IFNα和NF-κB mRNA表達差異顯著（P<0.05），其余基因表達差異不顯著；LiCl抑制LPS激活的TBK1活性后，IRF3和IRF7的表達水平發(fā)生下調(diào)，空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和I

5、RF7基因轉(zhuǎn)染組中MyD88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達水平下降，IL-6mRNA表達水平上升。IRF3基因轉(zhuǎn)染組中MyD88、TBK1、IL-6和IFNαmRNA表達差異顯著（P<0.05），IRF7基因轉(zhuǎn)染組中TRAF6、TBK1和IFNαmRNA表達差異顯著（P<0.05）。結(jié)果表明，豬IRF3和IRF7基因能提高PK15細胞中上游分子TBK1和下游基因IFNαmRNA表達，降低TLR4介導(dǎo)的信號通路中