人表皮生長(zhǎng)因子（hEGF）在大腸桿菌中的表達(dá)及其多克隆抗體的制備.pdf

1、人表皮生長(zhǎng)因子是由53個(gè)氨基酸組成的小分子量單鏈多肽類(lèi)細(xì)胞因子，它對(duì)酸和熱穩(wěn)定。它的顯著生物學(xué)效應(yīng)是能夠促進(jìn)內(nèi)外表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，在臨床上可用于治療燒傷、創(chuàng)傷、角膜的移植、胃酸、十二指腸潰瘍等；還可用于化妝品。由于其具有特殊的生物學(xué)效應(yīng)使其有很大的潛在經(jīng)濟(jì)效益。 1960年Cohen首次從小鼠頜下腺中發(fā)現(xiàn)了表皮生長(zhǎng)因子，之后的40幾年又陸續(xù)在人體和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)了與表皮生長(zhǎng)因子結(jié)構(gòu)與性質(zhì)相近的生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF α)

2、、牛痘病毒生長(zhǎng)因子(VGF)、休普氏纖維瘤生長(zhǎng)因子(SFGF)、粘液瘤生長(zhǎng)因子(MGF)、兩性調(diào)節(jié)蛋白(ampiregulin)、雙向調(diào)節(jié)素(arnphiregtuli，AR)、表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin，Epl)、結(jié)合肝素的EGF樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF)、痘苗病毒生長(zhǎng)因子(VVGF)等，大小都在50～80個(gè)氨基酸之間，在一級(jí)結(jié)構(gòu)上有20％～90％的同源性，它們都含有六個(gè)半胱氨酸，形成3對(duì)二硫鍵和表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體結(jié)合且具有相

3、似的生物活性，構(gòu)成了表皮生長(zhǎng)因子家族。 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用PCR技術(shù)人工合成了人表皮生長(zhǎng)因子hEGF的成熟肽DNA序列。將其克隆到pGEM-T載體上，測(cè)序正確后將其克隆至pGEX-2T融合表達(dá)載體上構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX-2T-hEGF。經(jīng)測(cè)序后正確的重組子轉(zhuǎn)化入BL21(DE3.0)表達(dá)宿主菌中，加入終濃度為1.0mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)GST-