實(shí)驗(yàn)性隱睪生殖細(xì)胞凋亡與Bcl-xl和Bad表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、背景與目的：隱睪癥是指睪丸位于腎臟和陰囊之間的任何位置。是小兒泌尿生殖系統(tǒng)的常見病，可能導(dǎo)致男子成年后不育。人類睪丸是一種具有高度增殖能力的組織，但成年人睪丸中產(chǎn)生的成熟精子的數(shù)量要比預(yù)計生成的精子數(shù)少20％～75％。大量研究表明睪丸中生精細(xì)胞這種自發(fā)性退化是通過凋亡而發(fā)生的。人類睪丸生殖細(xì)胞的凋亡是一個多基因參與的復(fù)雜的過程，其中Bcl-2/Bax基因家族、p53基因、CREM基因、Fas/Apo-1基因、HSP基因族以及c-myc基

2、因等都在人類睪丸生殖細(xì)胞的凋亡過程中起到一定的作用。其中Bcl-2/Bax基因家族包含兩類功能相反的基因，一類是抑制細(xì)胞凋亡的基因Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Bfl-1、Brag-1、Mcl-1和A1等，另一類是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因Bax、Bak、Bok、Bcl-xs、Bad、Bid、Bik、Blk和Hrk等。Bcl-xl、Bad是目前新發(fā)現(xiàn)的一組抑制、促進(jìn)凋亡基因，在睪丸中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)理，目前國內(nèi)外未見報道。本文旨在從分子生

3、物學(xué)角度探討兩種基因在實(shí)驗(yàn)性隱睪癥生殖細(xì)胞凋亡中的作用。 方法將50只成年健康SD雄性大鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)性隱睪癥組(n=23)和對照組(n=27)。建立右側(cè)腹腔隱睪模型，術(shù)后第3天處死實(shí)驗(yàn)組7只大鼠和對照組9只大鼠，取實(shí)驗(yàn)組隱睪側(cè)睪丸和對照組正常睪丸作研究對象。同理術(shù)后第7、10天處死實(shí)驗(yàn)組各8只大鼠和對照組各9只大鼠，取實(shí)驗(yàn)組隱睪側(cè)睪丸和對照組正常睪丸作研究對象。采用原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測生殖細(xì)胞凋亡，免疫組化SA

4、BC法檢測Bcl-xl、Bad基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組與對照組比較采用t檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組之間比較采用方差分析。生殖細(xì)胞凋亡指數(shù)與Bad/Bcl-xl、Bad和Bcl-xl作多重回歸分析。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果1.凋亡細(xì)胞主要是初級精母細(xì)胞和圓形精子細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組生殖細(xì)胞凋亡指數(shù)高于對照組。術(shù)后3天組生殖細(xì)胞凋亡指數(shù)為5.54±1.93％，7天組為7.33±1.61％，10天組為9.48±2.96％，對照組為2.26±0.9

5、2％。實(shí)驗(yàn)組分別與對照組比較(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組生殖細(xì)胞凋亡指數(shù)隨術(shù)后時間延長而增加，術(shù)后3天組與術(shù)后7天組比較(P=0.723)。與術(shù)后10天組比較(P＜0.05)，術(shù)7后天組與術(shù)后10天組比較(P＜0.05)。 2.實(shí)驗(yàn)組Bcl-xl陽性表達(dá)率低于對照組，術(shù)后3天組為67.30±6.11％，7天組為54.00±8.75％，10天組為35.85±6.55％，對照組為76.00±6.83％。實(shí)驗(yàn)組分別與對照組比較(P＜0.0

6、1)。實(shí)驗(yàn)組Bcl-xl陽性表達(dá)率隨術(shù)后時間延長而降低。術(shù)后3天組與術(shù)后7天組比較(P＜0.05)，與術(shù)后10天組比較(P＜0.01)。術(shù)后7天組與術(shù)后10天組比較(P＜0.01)。 3.實(shí)驗(yàn)組(3天組除外)Bad陽性表達(dá)率高于對照組。術(shù)后3天組為15.17±1.83％，對照組為13.88±3.58％。二組相比(P=0.46)。術(shù)后7天組為46.22±9.30％，10天組為46.22±9.30％，對照組為13.88±3.58％。

7、術(shù)后7、10天組分別與對照組比較均是(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組之間比較，術(shù)后3天組與術(shù)后7天組比較(P＜0.01)，與術(shù)后10天組比較(P＜0.01)。術(shù)后7天組與術(shù)后10天組比較(P=0.344)。 4.生殖細(xì)胞凋亡指數(shù)AI(Y)與Bad/Bcl-xl(X1)、Bad(X2)和Bcl-xl(X3)作多重回歸分析R=0.787F=29.383P=0.000表明從整體而言三個自變量構(gòu)成的回歸方程解釋AI變化與三個自變量相關(guān)是有統(tǒng)計學(xué)

8、意義的。Y=0.072+0.026X1+0.010X2-0.059X3P＞0.05表明與三個因素不是線性關(guān)系。Bad/Bcl-xl與細(xì)胞凋亡指數(shù)呈直線回歸關(guān)系(Y=0.02835+0.04937X1F=29.383P＜0.01。) 結(jié)論1.對照組生殖細(xì)胞凋亡較少。實(shí)驗(yàn)組生殖細(xì)胞凋亡隨著術(shù)后時間的延長而增加。 2.對照組生殖細(xì)胞Bcl-xl基因呈高表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組生殖細(xì)胞Bcl-xl呈低表達(dá)，且表達(dá)逐漸降低。 3.對照