GABA受體的活化抑制NR2A的酪氨酸磷酸化拮抗缺血性腦損傷的研究.pdf

1、目的: 神經(jīng)的興奮性和抑制性之間的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)于維持腦功能的正常功能具有重要的意義。眾所周知，腦缺血不僅可以增強(qiáng)神經(jīng)的興奮性，而且可以減弱其抑制性，從而打破興奮性和抑制性之間的平衡，導(dǎo)致進(jìn)一步的神經(jīng)損傷。谷氨酸和GABA能神經(jīng)遞質(zhì)起著相反的作用，因此增強(qiáng)GABA受體的活性勢(shì)必會(huì)拮抗谷氨酸引起的興奮性。本研究擬通過(guò)GABA(A)受體激動(dòng)劑蠅蕈醇(muscimol)和GABA(B)受體的激動(dòng)劑氯苯氨丁酸(baclofen)激活GABA受體、增

2、強(qiáng)神經(jīng)的抑制性信號(hào)觀察Muscimol和Baclofen對(duì)腦缺血復(fù)灌后的神經(jīng)元是否有一定的保護(hù)作用，對(duì)腦缺血引起的SRC介導(dǎo)的NMDA受體活化是否有抑制作用以及可能的分子機(jī)制。 方法: 采用四動(dòng)脈結(jié)扎法構(gòu)建大鼠全腦缺血模型。缺血前30分鐘單獨(dú)或聯(lián)合給Sprague-Dawley大鼠腹腔注射蠅蕈醇(1mg/kg)、氯苯氨丁酸(20mg/kg)，缺血前60分鐘腹腔注射MK-801(3mg/kg)，缺血前30分鐘腦室注射PP2(SRC

3、特異性抑制劑)或白屈菜紅堿(chelerythrine chloride,PKC的抑制劑)并運(yùn)用免疫印跡、免疫沉淀、免疫組化等試驗(yàn)手段對(duì)蛋白質(zhì)的磷酸化以及蛋白質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行研究，此外，還應(yīng)用焦油紫染色和TUNEL染色等方法檢測(cè)了缺血復(fù)灌誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元的缺失和凋亡。 結(jié)果: GABA(A)激動(dòng)劑蠅蕈醇(muscimol)、GABA(B)受體的激動(dòng)劑氯苯氨丁酸(baclofen)能夠顯著地減弱全腦缺血及體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細(xì)胞

4、缺糖缺氧誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷，具有神經(jīng)保護(hù)作用，且聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果更加顯著。更重要的是，這兩種受體激動(dòng)劑的聯(lián)合使用可以明顯抑制腦缺血誘導(dǎo)的SRC激酶的酪氨酸磷酸化以及SRC-PSD-95-NR2A信號(hào)模塊的組裝，從而進(jìn)一步抑制了NR2A的酪氨酸磷酸化，下調(diào)了NMDA受體的功能。此外，PP2、MK801以及PKC的特異性抑制劑白屈菜紅堿也能夠阻斷缺血復(fù)灌誘導(dǎo)的Src和NR2A的酪氨酸磷酸化的增加。更有意義的是，單獨(dú)給予MK801處理與M