AM251保護(hù)缺血性腦損傷分子機(jī)制的研究——通過(guò)GABA-,A-受體介導(dǎo)抑制NR2A酪氨酸磷酸化.pdf

1、目的: 據(jù)報(bào)道，大麻素受體中的1型受體(CB1)主要表達(dá)在GABA能中間神經(jīng)元的軸突末端，激活CB1能夠抑制GABA能突觸傳遞。那么，甩AM251(一種CB1選擇性拮抗劑)負(fù)性調(diào)節(jié)CB1可能增加GABA的釋放。在海馬CA1區(qū)，突觸前GABA能中間神經(jīng)元發(fā)出的軸突支配海馬的錐體細(xì)胞，與突觸后的錐體細(xì)胞形成抑制性突觸聯(lián)系。因此，本試驗(yàn)研究的目的是闡明甩AM251負(fù)調(diào)CB1對(duì)缺血/復(fù)灌引起的大鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的損傷是否有保護(hù)作用以及這

2、些作用的潛在機(jī)制。 方法: 選用雄性SD大鼠，清潔級(jí)，250 g-300 g，采用大鼠四動(dòng)脈結(jié)扎缺血模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血/復(fù)灌組、溶劑對(duì)照組和給藥組，并采用免疫印跡，免疫沉淀，免疫組織化學(xué)和形態(tài)學(xué)等技術(shù)進(jìn)行研究。 結(jié)果: 1.AM251能夠?qū)θ毖蠛ｑRCA1區(qū)錐體神經(jīng)元起到保護(hù)作用； 2.給予AM251在缺血/復(fù)灌6 h時(shí)明顯抑制了Src的激活并抑制Src介導(dǎo)的NR2A的酪氨酸磷酸化，而

3、給予CB1選擇性激動(dòng)劑油酸酰胺(Oleamide)、CB1反義寡核苷酸分別逆轉(zhuǎn)了AM251的這種抑制作用；另外，Src和NR2A的酪氨酸磷酸化在單獨(dú)給予油酸酰胺后與缺血/復(fù)灌組并沒(méi)有明顯變化； 3.電壓門(mén)控型鈣通道的非特異性阻滯劑氯化鎘也逆轉(zhuǎn)了AM251對(duì)Src和NR2A酪氨酸磷酸化的抑制作用； 4.單獨(dú)給予GABAA受體激動(dòng)劑蠅蕈醇(Muscimol)明顯降低Src和NR2A酪氨酸磷酸化，而GABAA受體拮抗劑荷包牡丹

4、堿(Bicuculline)卻逆轉(zhuǎn)了AM251對(duì)Src和NR2A酪氨酸磷酸化的抑制作用； 5.AM251明顯抑制了缺血/復(fù)灌后NR2A，PSD95和Src三者之間的結(jié)合，而荷包牡丹堿阻斷了AM251所導(dǎo)致的抑制作用。但是，單獨(dú)給予蠅蕈醇后抑制了NR2A，Src和PSD95的結(jié)合。 6.Src的活化介導(dǎo)了NR2A的酪氨酸磷酸化. 結(jié)論: 1.AM251能顯著抑制缺血/復(fù)灌引起的海馬神經(jīng)元的缺失和凋亡。