牦牛角和毛囊的形態(tài)發(fā)生及相關(guān)基因的表達(dá)分析.pdf

1、牦牛是高原牧區(qū)特有的畜種資源，牛角是牛科動(dòng)物特有的組織結(jié)構(gòu)，是動(dòng)物爭斗和自衛(wèi)的武器。然而在現(xiàn)代集約化生產(chǎn)過程中，牛角由于常造成動(dòng)物及人員的傷害而成為了制約家畜產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的性狀。牦牛之所以稱為牦牛的原因之一是被毛較長且厚密，這是牦牛適應(yīng)高寒的生存環(huán)境的基礎(chǔ)，同時(shí)也能為牧民帶來一定的經(jīng)濟(jì)效益?；诖?，對牦牛角的形態(tài)發(fā)育及性狀基因、毛囊的形態(tài)發(fā)生及其調(diào)控因子進(jìn)行研究，為牦牛的分子育種和科學(xué)管理提供科學(xué)依據(jù)。
　　采集牦牛角發(fā)育初期不同胎

2、齡的有角和無角牛的角基及額部皮膚組織，通過組織切片技術(shù)觀察對比牛角的形成和發(fā)育；利用 qRT-PCR技術(shù)檢測牛角性狀候選基因 OLIG1、OLIG2、IFNAR1、IFNAR2、C1H21orf62、GCFC1、IFNGR2、SYNJ1、IL10RB、GART、RXFP2、FOXL2、TWIST1、TWIST2、ZEB2、E-cadherin和P-cadherin mRNA在角基間及皮膚間的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示，牦牛角在60~75d胎齡

3、間出現(xiàn)，角基早期為黑色素顆粒圍繞的白色膠質(zhì)狀圓點(diǎn)。隨著胎齡的增加，角基表皮逐漸增厚，表現(xiàn)為棘層的角質(zhì)形成細(xì)胞囊泡化且細(xì)胞層數(shù)增多，角質(zhì)層較厚。角基早期未觀察到毛囊發(fā)育，直到胎齡135d時(shí)出現(xiàn)毛芽，比皮膚晚50天左右；而同胎齡無角牛角基組織結(jié)構(gòu)與皮膚無明顯差異。候選基因 OLIG1、IFNAR1、C1H21orf62、SYNJ1、IL10RB、GART、RXFP2、TWIST2和E-cadherin在角基間和皮膚間轉(zhuǎn)錄量差異不顯著。 IF

4、NGR2、FOXL2、TWIST1和 P-cadherin在有角和無角牦牛角基間轉(zhuǎn)錄量差異顯著。IFNAR2和 GCFC1在角基間和皮膚間轉(zhuǎn)錄量差異都顯著。OLIG2和ZEB2在角基間轉(zhuǎn)錄量差異極顯著。推測OLIG2和FOXL2可能是牦牛角性狀的候選基因，同時(shí) ZEB2、TWIST1和 IFNGR2基因可能對牛角的發(fā)育具有重要作用，而P-cadherin基因可能參與了牛角的發(fā)育。
　　采用牦牛胚胎額部皮膚的組織切片，觀察毛囊的形態(tài)

5、發(fā)生過程。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)，定位 E鈣黏蛋白在毛囊中的表達(dá)。使用 qRT-PCR方法，比較不同胎齡胎兒頭部皮膚中 E-cadherin mRNA轉(zhuǎn)錄水平。發(fā)現(xiàn)毛囊黑色素顆粒在牦牛胎兒皮膚中不同部位先后聚集，牦牛胚胎期皮膚初級毛囊在胎齡60~70d時(shí)形成毛芽，胎齡130d時(shí)形成毛球結(jié)構(gòu)。次級毛囊在胎齡80~90d時(shí)從初級毛囊中分化出來；且毛囊的發(fā)育可能最先是從頭部開始的，其中在下唇部、眉毛、睫毛、角緣發(fā)育最明顯；E鈣黏蛋白作用于皮膚的