HER-2及其p38MAPK—MMP-2信號通路對人卵巢癌侵襲力的影響.pdf

1、背景和目的 卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤，其死亡率居?jì)D科腫瘤首位。如何抑制卵巢癌侵襲、轉(zhuǎn)移等問題一直是卵巢癌治療的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。原癌基因HER-2位于人染色體17q21，屬于表皮生長因子受體家族成員，在15％～30％的卵巢癌中擴(kuò)增或過表達(dá)，大量研究表明HER-2參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展，是防治卵巢癌的一個(gè)新的靶點(diǎn)。但HER-2受體與其下游信號傳導(dǎo)通路中的 p38、p-p38、MMP-2和TIMP-2在卵巢癌中的相互關(guān)系目前研究較少。

2、為此，本課題從兩方面進(jìn)行研究。 第一部分，通過研究石蠟切片中HER-2、p38、p-p38、MMP-2和TIMP-2在三種卵巢漿液性上皮性腫瘤中的表達(dá)情況，探討 HER-2 過表達(dá)與p38、p-p38、MMP-2和 TIMP-2的表達(dá)在卵巢癌中的相互關(guān)系； 第二部分，研究HER-2受體胞外區(qū)I亞區(qū)被工程抗體chA21結(jié)合后，體外培養(yǎng)的人卵巢癌細(xì)胞SKOV3侵襲能力的變化及其可能的作用機(jī)制。 方法 1)收

3、集49例卵巢漿液性上皮腫瘤，其中漿液性囊腺瘤17例，交界性腫瘤7例，漿液性囊腺癌25例(中位年齡49.2歲；TNM分期，Ⅰ、Ⅱ期18例，Ⅲ、Ⅳ期7例；腫瘤大小≤3cm 5例，>3cm 20例；無轉(zhuǎn)移15例，有轉(zhuǎn)移10例)；2)利用組織微陣列技術(shù)和免疫組化法檢測上述病例中 HER-2、p38、p-p38、MMP-2和 TIMP-2 的表達(dá)情況，分析上述指標(biāo)的相互關(guān)系；3)在37℃，5％CO2飽和濕度條件下，不同濃度chA21作用于人卵巢癌

4、細(xì)胞SKOV3；4)MTT比色法檢測chA21(1.5～24mg/L)對SKOV3細(xì)胞的生長抑制作用；Transwell侵襲小室測定法檢測SKOV3侵襲力的變化；免疫細(xì)胞化學(xué)方法(ICC)定量分析SKOV3細(xì)胞中MMP-2和TIMP-2表達(dá)的變化。ICC和Western blotting檢測p38和p-p38蛋白的改變；結(jié)果 1)HER-2的過表達(dá)率以及p38、p-p38、MMP-2和TIMP-2的陽性率在卵巢漿液性腺癌及漿液性交界性腫

5、瘤中明顯高于漿液性囊腺瘤(P<0.05)；2)p38陽性率和MMP-2/TIMP-2比值隨著卵巢惡性腫瘤的發(fā)展逐步提高(P<0.05)；3)p-p38與腫瘤的分期、大小、患者年齡及轉(zhuǎn)移情況均呈明顯相關(guān)性(P<0.05)，但p38蛋白的表達(dá)僅和患者年齡有顯著相關(guān)性(P<0.05)。在卵巢漿液性腺癌中HER-2的過表達(dá)與p-p38表達(dá)顯著相關(guān)(P<0.05)，HER-2過表達(dá)病例中MMP-2和TIMP-2表達(dá)全部陽性；4)chA21(1.5

6、、3、6和12 mg/L)作用36h，SKOV3增殖抑制率分別為17.39％、19.26％、20.37％和21.56％。SKOV3生長被顯著抑制；5)chA21(3、6和12mg/L)作用24h，SKOV3的侵襲力明顯降低，抑制率分別為21.03％、36.99％和87.19％，且呈劑量依賴性；chA21(6 mg/L)分別作用24和29h，SKOV3侵襲抑制率隨時(shí)間推移顯著升高，分別為39.92％和61.05％，呈劑量依賴性；6)ehA

7、21(6和12 mg/L)作用24h可顯著降低SKOV3細(xì)胞中p38、p-p38、MMP-2的表達(dá)及MMP-2/TIMP-2比值，上調(diào)TIMP-2的表達(dá)(P<0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)和Westem blotting實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)p-p38的降低程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于p38(P<0.05)。 結(jié)論 HER-2、p38MAPK、MMP-2和TIMP-2通路可能參與了卵巢癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。HER-2受體胞外區(qū)Ⅰ亞區(qū)在細(xì)胞信號傳導(dǎo)中參與了人卵巢癌細(xì)