抗HER-2抗體對(duì)人卵巢癌血管生成的影響.pdf

1、背景和目的：原癌基因HER-2屬于表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員，在20％～30％的卵巢癌中過(guò)表達(dá)，參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。研究顯示HER-2過(guò)表達(dá)與腫瘤組織內(nèi)微血管密度明顯相關(guān)，HER-2 激活后可通過(guò)多種信號(hào)通路來(lái)調(diào)控血管生成。為此，本課題擬在觀(guān)察HER-2、VEGF及微血管密度（microvessel density，MVD）在人卵巢腫瘤組織中的相關(guān)性的基礎(chǔ)上，研究抗HER-2工程抗體ChA21聯(lián)合Herceptin對(duì)HER-2過(guò)表達(dá)

2、人卵巢癌細(xì)胞SKOV3血管生成的影響。
　　 方法：
　　 1）收集49例人卵巢漿液性上皮腫瘤組織，其中良性17例，交界性7例，惡性25例，利用免疫組化法檢測(cè)上述病例中HER-2、VEGF的表達(dá)情況及MVD值，并分析其相關(guān)性；
　　 2）建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型，隨機(jī)分成陰性對(duì)照組、ChA21組（30mg/kg）、Herceptin組（20mg/kg）、ChA21+Herceptin聯(lián)合用藥組(30

3、mg/kg+20mg/kg)，每周兩次尾靜脈注射給藥，連續(xù)用藥3周后，處死全部荷瘤裸鼠，計(jì)算抑瘤率，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)移植瘤組織中VEGF表達(dá)的情況及MVD值；
　　 3）抗HER-2工程抗體ChA21（5mg.L-1）聯(lián)合Herceptin（5mg.L-1）作用于HER-2過(guò)表達(dá)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3，應(yīng)用MTS法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，ELISA法檢測(cè)SKOV3上清液中VEGF分泌情況，Transwell小室檢測(cè)SKOV3侵襲

4、力變化，Western blotting檢測(cè)VEGF、Akt/pAkt蛋白的變化，同時(shí)應(yīng)用MTS、Transwell方法檢測(cè)兩種抗體聯(lián)合作用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）增殖和遷移的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1）HER-2的過(guò)表達(dá)率、VEGF陽(yáng)性率以及MVD值在卵巢漿液性囊腺癌及漿液性交界性腫瘤中明顯高于漿液性囊腺瘤（P<0.01）；HER-2、VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)與MVD值呈顯著正相關(guān)（P<0.01

5、）；HER-2、VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)以及MVD值與腫塊大小、腹腔轉(zhuǎn)移情況呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與患者年齡、TNM分期無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）；
　　 2）ChA21聯(lián)合Herceptin連續(xù)用藥3周后，可顯著抑制SKOV3裸小鼠移植瘤的生長(zhǎng)，其抑瘤率顯著高于ChA21或Herceptin單藥組；聯(lián)合用藥組移植瘤組織中VEGF的表達(dá)以及MVD值顯著低于陰性對(duì)照組、ChA21或Herceptin單藥組（P<

6、0.01）。3）體外培養(yǎng)條件下，ChA21聯(lián)合Herceptin作用48h，可顯著抑制SKOV3的生長(zhǎng)和侵襲力；ChA21聯(lián)合Herceptin作用12h，SKOV3上清液中VEGF分泌量也顯著低于ChA21或Herceptin單藥組；Western blotting顯示ChA21聯(lián)合Herceptin作用于SKOV3細(xì)胞48 h后，可顯著降低VEGF、pAkt蛋白的表達(dá)；MTS、Transwell方法檢測(cè)兩種抗體聯(lián)合作用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮