原發(fā)性腎病綜合征患兒激素沖擊治療前后白細胞介素8基因表達.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文原發(fā)性腎病綜合征患兒激素沖擊治療前后白細胞介素8基因表達姓名：羅鋼申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：姜紅2002.3.12PBMCIL一8mRNA表達檢測：觀察組(分治療前組、治療后組)：20例隨機選自上述30例患者中，其中單純型13例，腎炎型7例。對照組：8例隨機選自上述18例健康兒童中。二、實驗試劑和儀器人IL一8ELISA試劑盒購于深圳晶美生物工程有限公司；Trizol購于GIBCOBRLUSA公司；

2、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于GIBCOBRLUSA公司；EL一309(uSA)全自動酶標儀；PTC一200MJRESERCHUSAPCR擴增儀；GIS700D天能數(shù)碼凝膠掃描分析成像系統(tǒng)等。實驗方法1標本采集：激素沖擊治療(甲基強的松龍30mg／Kg靜脈滴注，連三天)前和沖擊后(沖擊結(jié)束第二天)分別采集靜脈血2ml和肝素抗凝血5ml。2ELISA試劑盒檢測靜脈血IL一8：參照使用說明，反應(yīng)后標本即刻測量0D伽。值(5分鐘內(nèi))。繪制標準曲線，算出樣本

3、中IL一8的濃度。3RT—PCR檢測PBMCIL一8mRNA表達：按照Trizol說明書提取總RNA；按照GIBCOBRL逆轉(zhuǎn)錄試劑盒手冊合成cDNA第一條鏈后進行PCR擴增(94℃變性5分鐘后，以94℃30秒、55℃1分鐘、72℃2分鐘的順序循環(huán)35次，最后72。C延伸10分鐘)。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色，經(jīng)GIS700D天能數(shù)碼凝膠掃描分析成像系統(tǒng)分析照相。IIJ一8引物序列：Upwardmer：5：從GGAACC^lIC