凋亡抑制在口腔表皮樣癌耐藥細胞株KBv200耐藥機制中的作用及其逆轉.pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文凋亡抑制在口腔表皮樣癌耐藥細胞株KBv200耐藥機制中的作用及其逆轉姓名：張金廷申請學位級別：博士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學指導教師：崔慧先20040401中文摘要ISH)的方法檢測抗凋亡基因Bcl2、Cmyc在KB及KBv200細胞中的表達差異，以期發(fā)現(xiàn)抗凋亡基因在KBv200細胞耐藥中的作用。隨著人們對耐藥機理的深入研究，越來越多的耐藥逆轉劑被開發(fā)出來，但或因副作用大，或因體內作用逆轉效果不明顯，或因價格昂貴

2、等種種原因，迄今為止，人們尚未發(fā)現(xiàn)一種理想的耐藥逆轉劑，中藥的資源豐富，至今已達一萬余種，藥理作用廣泛，而且許多中藥本身即有抗癌作用，提示在中藥中篩選MDR逆轉劑具有很大的優(yōu)勢，苦參堿(Matrine)為中藥苦參的有效成分之一，化學分子式為C25H24N2o，可人工合成，最近發(fā)現(xiàn)苦參堿體外具有抗腫瘤的作用，可以抑制腫瘤細胞增殖和轉移，促進凋亡，以及誘導腫瘤細胞分化，但仍有諸多機制不明，因此，本研究應用MTT法、流式細胞術、瓊脂糖DNA電

3、泳等方法觀察了苦參堿對KB及KBv200細胞凋亡誘導的作用。材料與方法:1凋亡抑制在人口腔上皮癌KBv200細胞耐藥中的作用人口腔表皮樣癌KB細胞系及其VCR耐藥細胞系KBv200系購自中國協(xié)和醫(yī)科大學細胞庫。1.1細胞培養(yǎng):將KB及KBv200細胞用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，內含10%小牛血清、青霉素100Uml鏈霉素IOOP留ml置37C5%CO:環(huán)境下培養(yǎng)，每日觀察細胞生長情況。待細胞鋪滿整個培養(yǎng)瓶底面后，進行細胞傳代，耐藥細胞

4、的培養(yǎng)液中加入lOPgml的VCR維持培養(yǎng)，實驗前一周撤藥。1.2耐藥譜分析(MTT法):取對數(shù)生長期的KB及KBv200細胞，0.25%的EDTA消化、計數(shù)后，以1X105ml的濃度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔20如1，培養(yǎng)24小時后加入生理鹽水稀釋的不同濃度的各種化療藥物，共同作用24小時后，每孔加入20川MTT溶液，再培養(yǎng)4小時后，離心去除培養(yǎng)液，每孔加入二甲基亞諷150川用震蕩器震蕩lOmin后，在全自動酶標儀上選擇波長570nm測

5、定吸光值(A值)，比色時空白孔調零，全部實驗重復3次，取平均值。根據(jù)A值計算細胞存活率(VitalrateVR)，計算公式為:細胞存活率(%)二用藥組A值對照組A值X100%。根據(jù)各藥物VR，由藥物濃度的對數(shù)值與VR線性回歸求出各藥物的半數(shù)抑制率(IC50)。計算耐藥倍數(shù)(resistantindexRI)，耐藥倍數(shù)=ICso(KBv200)ICso(KB)。1.3Hoechst33258熒光染色法檢測凋亡率:細胞與VCR共同作用24小