丙戊酸在肺癌耐藥細(xì)胞株中的作用及機(jī)理初步探討.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)利用VPA(丙戊酸)作用于A549/DDP細(xì)胞，研究V PA在體外條件下對(duì)人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞的增殖和凋亡的影響，通過(guò)對(duì)Bcl-2，P-gp，NF-kBP65，Caspase-3測(cè)定，來(lái)探討其作用機(jī)理。 方法：采用體外細(xì)胞培養(yǎng)，設(shè)對(duì)照組(單細(xì)胞懸液)、實(shí)驗(yàn)1組(單細(xì)胞懸液+1mmol/L VPA處理)、實(shí)驗(yàn)2組(單細(xì)胞懸液+2 mmol/L VPA處理)、實(shí)驗(yàn)3組(單細(xì)胞懸液+4 mmol/L VPA處理)，

2、以噻唑藍(lán)(MTT)比色試驗(yàn)為指標(biāo)，觀察VPA對(duì)人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞的增殖;用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)變化;用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Bcl-2，P-gp，P65，Caspase-3。 結(jié)果: (1)倒置顯微鏡下觀察:對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，呈叢簇狀排列，細(xì)胞長(zhǎng)梭形或多邊形，細(xì)胞形態(tài)飽滿，胞質(zhì)豐富，胞核居于細(xì)胞中央;實(shí)驗(yàn)組當(dāng)用藥濃度為1mmol/L時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)未見(jiàn)明顯抑制，2mmol/L以上隨藥物濃度增加，貼壁的正常細(xì)

3、胞數(shù)逐漸減少，這些細(xì)胞多散在或呈小堆排列，細(xì)胞皺縮呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)皺縮。 (2)VPA濃度為4mmol/L時(shí)，對(duì)A549/DDP細(xì)胞體外生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用。作用48小時(shí)，細(xì)胞抑制率分別為12.98％、20.02％、24.72％，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。在同一藥物濃度下，細(xì)胞抑制率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì);同一作用時(shí)間，細(xì)胞抑制率隨藥物濃度的增加呈增加趨勢(shì)。 (3)VPA處理24h后開(kāi)始出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯，隨濃度增

4、加，G1期細(xì)胞百分率增加，同時(shí)伴隨S期細(xì)胞百分率減少。 (4)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示： ①相對(duì)于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)各組凋亡分子Caspase-3表達(dá)明顯增加(分別為14.67±4.22、34.00±5.03、45.07±4.71)％：對(duì)照組(5.75±2.89)％；兩者之間比較有顯著差異(p<0.05)，且各實(shí)驗(yàn)組之間差異明顯。 ②實(shí)驗(yàn)組NF-κBP65表達(dá)(34.4±2.81、52.2±3.20、63.1±2.80)％；對(duì)

5、照組表達(dá)(75.2±5.19)％，兩者之間比較有顯著差異(p<0.001)且各實(shí)驗(yàn)組之間差異明顯。 ③實(shí)驗(yàn)各組Bcl-2表達(dá)(25.60±2.08、19.87±1.03、15.38±0.45)％：對(duì)照組表達(dá)為(42.67±1.38)％；各組之間比較顯著差異(p<0.05)。 ④實(shí)驗(yàn)組P-gp表達(dá)(40.98±0.51，31.07±0.90，30.77±1.21)％，對(duì)照組為(42.15±0.15)％：實(shí)驗(yàn)組2，3與對(duì)照組

6、相比p<0.05。 結(jié)論： (1)VPA對(duì)體外培養(yǎng)的人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。 (2)VPA對(duì)人肺腺癌A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1阻滯，且能增加Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)從而可能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 (3)通過(guò)對(duì)NF-κBP65測(cè)定，證實(shí)使用VPA造成NF-κB在胞質(zhì)中的降解；進(jìn)一步對(duì)NF-κB信號(hào)系統(tǒng)的下游因子Bcl-2測(cè)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)濃度組之