PRRSV感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)源性抗原加工遞呈功能影響的分子機(jī)制.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的病毒性疾病。豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)是PRRSV感染的主要靶細(xì)胞，是主要的抗原遞呈細(xì)胞。本文用PRRSVHB-2(sh)/2002經(jīng)體外和體內(nèi)感染PAM，通過分析PAM內(nèi)源性抗原加工遞呈相關(guān)分子的mRNA轉(zhuǎn)錄動(dòng)態(tài)和PAM表面MHCI類分子的表達(dá)變化，從分子和基因水平揭示了PRRSV感染對(duì)PAM內(nèi)源性抗原加工遞呈功能的影響。 用R

2、T-PCR技術(shù)從PAM中擴(kuò)增和克隆了與內(nèi)源性抗原加工遞呈相關(guān)分子LMP7、UBP、Hsp70、Hsp90、MHCclassI、β2-microglobulin、GRP94/gp96，calnexin的部分基因片段，經(jīng)測(cè)序鑒定后，應(yīng)用倍比稀釋的高純度質(zhì)粒，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)構(gòu)建出各相關(guān)分子的標(biāo)準(zhǔn)定量曲線和直線回歸方程。 用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析了PRRSV體外感染PAM的內(nèi)源性抗原加工遞呈相關(guān)分子mRNA的轉(zhuǎn)錄動(dòng)態(tài)。結(jié)

3、果表明，體外感染后UBPmRNA轉(zhuǎn)錄水平在48h內(nèi)一直處于上調(diào)狀態(tài)；LMP7、Hsp70、Hsp90、MHCclassI、β2-microglobulin、GRP94/gp96，calnexin的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均在感染后12h至48h之間被抑制，由此推測(cè)PRRSV感染肺泡巨噬細(xì)胞的內(nèi)源性抗原加工和遞呈功能受到抑制。 用PRRSV感染30頭仔豬后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析了不同時(shí)相PAM的內(nèi)源性抗原加工遞呈相關(guān)分子的mRN

4、A轉(zhuǎn)錄動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明，PRRSV感染后PAM的UBP和Hsp90mRNA轉(zhuǎn)錄水平在42天內(nèi)一直處于上調(diào)狀態(tài)；LMP7、Hsp70的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在感染后一直處于下調(diào)狀態(tài)；MHCclassI、β2-microglobulin、GRP94/gp96的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均在感染后3天被上調(diào)，7天和14天時(shí)均被下調(diào)，低于對(duì)照且差異顯著，在28天時(shí)上調(diào)，MHCclassⅠ的mRNA水平在28天時(shí)與對(duì)照沒有差異，β2-microglobulin、G

5、RP94/gp96在42天時(shí)轉(zhuǎn)錄水平恢復(fù)到正常水平；calnexin在感染3天時(shí)顯著上調(diào)，42天時(shí)恢復(fù)至正常水平。用流式細(xì)胞術(shù)分析了PAM表面MHCI類分子的表達(dá)動(dòng)態(tài)，結(jié)果表明，PRRSV感染后3天，感染組PAM表面的MHCI類分子表達(dá)增強(qiáng)，隨后下調(diào)，7天后其表達(dá)水平一直低于對(duì)照組，在28天時(shí)差異顯著。由此說明，PRRSV感染使豬肺泡巨噬細(xì)內(nèi)源性抗原加工和遞呈在感染早期受到嚴(yán)重抑制，后期有所恢復(fù)，但未達(dá)到正常水平，提示PRRSV感染可導(dǎo)