探索臍帶沃頓膠作為軟骨組織工程復(fù)合體前體的可行性初步研究.pdf

1、目的:本課題通過了解臍帶沃頓膠的組織形態(tài)和成分，分析沃頓膠是否可能作為一種新型的軟骨組織工程復(fù)合體前體。
　　方法:取足月健康新生兒新鮮臍帶:1、結(jié)構(gòu)研究將臍帶分別做橫行、縱行組織切片后，分別行HE染色并觀察沃頓膠的微觀形態(tài)、結(jié)構(gòu)。另取臍帶切成大小約5×1×1mm3的小塊固定后，利用掃描電鏡觀察臍帶沃頓膠表觀形態(tài)結(jié)構(gòu);2、成分研究取新鮮臍帶制備組織切片，通過PAS染色、Masson染色和免疫組化染色對(duì)切片分別染色并檢測(cè)，觀察染色后

2、沃頓膠被染色的情況。另取新鮮臍帶，去除臍帶外膜及臍帶動(dòng)靜脈，獲得沃頓膠，經(jīng)物理和化學(xué)消化的方法獲得細(xì)胞混懸液，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)混懸液中的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后用CD29、CD90、CD45三種細(xì)胞表面抗原標(biāo)記混懸細(xì)胞液中的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)混懸液中滿足CD29(+)、CD90(+)、CD45(-)三個(gè)條件的細(xì)胞在所有細(xì)胞中所占的百分比，計(jì)算出臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在總的細(xì)胞中所占的百分比。
　　結(jié)果:1、沃頓膠結(jié)構(gòu)通過HE

3、染色及電鏡，發(fā)現(xiàn)臍帶沃頓膠膠原纖維是以臍血管走向?yàn)橹行牡?，靠近血管以縱行為主，靠近外膜以環(huán)形為主的編制狀結(jié)構(gòu)，由外膜至內(nèi)側(cè)血管，纖維結(jié)構(gòu)由稀疏逐漸變得密集。沃頓膠纖維結(jié)構(gòu)之間存在空隙。2、沃頓膠成分沃頓膠主要成分含有膠原纖維、糖胺多糖及細(xì)胞，膠原成分中含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三種膠原，臍帶沃頓膠中所含有的細(xì)胞數(shù)目為(2.04±0.59)×106cell/g。沃頓膠中臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在所有的細(xì)胞中所占的比例為(54.67±19.02)％。