同種異體組織工程軟骨修復(fù)豬膝關(guān)節(jié)軟骨缺損可行性的研究.pdf

1、目的：
　　探討胚胎來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）體外構(gòu)建的組織工程軟骨移植修復(fù)同種異體大動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨缺損的可行性。
　　方法：
　　1．通過剖腹產(chǎn)術(shù)獲得胎齡為70天的胎豬，經(jīng)沖洗法獲得胎豬骨髓液經(jīng)經(jīng)貼壁培養(yǎng)法獲得胎豬BMSCs，抽取成年豬（大于1歲）骨髓液經(jīng)貼壁培養(yǎng)法獲得成年豬BMSCs，體外擴(kuò)增培養(yǎng)并觀察細(xì)胞形態(tài)，描記生長曲線，對比兩種細(xì)胞

2、的擴(kuò)增能力。對BMSCs進(jìn)行成骨、成脂、成軟骨三向誘導(dǎo)。通過對比胎豬BMSCs和成年豬BMSCs的體外擴(kuò)增能力和多向分化潛能，對比兩種細(xì)胞的干細(xì)胞特性。
　　2．分別將擴(kuò)增后的胎豬BMSCs和成年豬BMSCs以108/ml的細(xì)胞濃度接種于聚乳酸包埋的聚羥基乙酸支架，體外誘導(dǎo)培養(yǎng)8周后取材。通過大體觀察、糖胺聚糖（GAG）含量測定、總膠原含量測定、生物力學(xué)測定以及組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)染色等方法對兩種細(xì)胞構(gòu)建的組織工程軟骨相關(guān)生物學(xué)

3、特性進(jìn)行比較，對比兩種細(xì)胞體外構(gòu)建組織工程軟骨的能力。
　　3.以上海白豬為動(dòng)物模型，建立豬膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，用胎豬BMSCs體外構(gòu)建的軟骨修復(fù)缺損區(qū)域。分別于修復(fù)術(shù)后3個(gè)月和6個(gè)月取材，通過大體觀察及組織形態(tài)學(xué)計(jì)量分析、總膠原含量測定等檢測評估修復(fù)軟骨缺損情況。
　　結(jié)果：
　　1．胎豬骨髓和成年豬骨髓中含有基質(zhì)干細(xì)胞。胎豬BMSCs和成年豬BMSCs相比，有更好的增殖能力，能夠滿足構(gòu)建組織的種子細(xì)胞量的需求。經(jīng)過

4、傳代后BMSCs，具有至少向三類組織細(xì)胞定向分化的潛能，胎豬BMSCs在成骨和成脂分化能力均優(yōu)于成年豬BMSCs，顯示了胎豬BMSCs更好的干細(xì)胞特性。
　　2.胎豬 BMSCs在體外構(gòu)建出較好的組織工程軟骨，其和成年豬BMSCs構(gòu)建的軟骨相比中空現(xiàn)象不明顯，組織學(xué)，力學(xué)和定量結(jié)果都顯示胎豬BMSCs構(gòu)建的軟骨質(zhì)量優(yōu)于成年豬BMSCs構(gòu)建的軟骨。因此，胎豬BMSCs是軟骨組織工程良好的種子細(xì)胞來源。
　　3.從術(shù)后取材大體觀

5、我們可以推測胎豬 BMSCs構(gòu)建的組織工程軟骨有望修復(fù)同種異體豬膝關(guān)節(jié)軟骨缺損，但是否能成功修復(fù)缺損還需要組織學(xué)，定量及生物力學(xué)等方面的進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　結(jié)論：
　　1.胚胎骨髓中含有基質(zhì)干細(xì)胞，其體外擴(kuò)增能力和多向分化能力均優(yōu)于成年來源骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。
　　2.胚胎來源BMSCs體外可以構(gòu)建出質(zhì)量良好的組織工程軟骨。
　　3.胚胎來源 BMSCs構(gòu)建的組織工程軟骨修復(fù)大動(dòng)物膝關(guān)節(jié)軟骨缺損體內(nèi)初步結(jié)果顯示有修復(fù)的