糖尿病性心肌病大鼠3-NT和TGF-β1的表達(dá)及氮氧自由基化合物Tempol對(duì)其干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　通過腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）的方法建立糖尿病性心肌?。―iabetic cardiomyopathy，DCM)大鼠模型，應(yīng)用氮氧自由基化合物Tempol對(duì)DCM大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察DCM大鼠心肌3硝基酪氨酸（3-nitmtynosine,3-NT）及轉(zhuǎn)化因子β1（Transforming growth factor betal-1，TGF-β1）的表達(dá)情況，探究Tempol對(duì)DCM大鼠的作用及可能機(jī)制。
　　方

2、法：
　　1、隨機(jī)取42只健康雄性SD大鼠，體重為200-250g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)取26只分為模型組，按55mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素的方法先建立大鼠糖尿?。―iabetes mellitus，DC)模型。余下16只大鼠分為健康對(duì)照組，對(duì)照組腹腔注射等劑量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
　　2、4周后隨機(jī)將2只造模大鼠處死，取心肌組織進(jìn)行HE染色及Masson三色染色觀察大鼠心肌結(jié)構(gòu)，如果HE染色發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌

3、出現(xiàn)不同程度的變性、壞死，且Masson染色提示心肌細(xì)胞間成纖維細(xì)胞、膠原纖維增生，則表明已成功建立DCM動(dòng)物模型。
　　3、16只健康大鼠及24只造模成功的大鼠再次進(jìn)行分組。分組及處理方式如下：
　?。?）健康生理鹽水組（NC+NS）：8只健康對(duì)照組大鼠，常規(guī)飲食，并按18mg/kg/d劑量給予生理鹽水灌胃8周。
　?。?）健康Tempol干預(yù)組（NC+Tempol）：另外8只健康對(duì)照組大鼠給以常規(guī)飲食，同時(shí)給予18

4、mg/kg/d劑量的Tempol進(jìn)行灌胃干預(yù)8周。
　?。?）DCM模型組（DCM）：12只DCM大鼠常規(guī)飲食，給予18mg/kg/d劑量的生理鹽水灌胃8周。
　?。?）DCM模型Tempol干預(yù)組（DCM+Tempol）：給以常規(guī)飲食，同時(shí)給予18mg/kg/d劑量的Tempol進(jìn)行灌胃干預(yù)8周。
　　4、8周后采用HE染色及Masson染色分別對(duì)實(shí)驗(yàn)SD大鼠心肌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察；用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

5、SD大鼠血清3-NT及TGF-β1的表達(dá)；用免疫組化分析法檢測(cè)SD大鼠心肌3-NT及TGF-β1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、利用STZ腹腔注射法成功建立了糖尿病性心肌病模型。
　　2、DCM模型組及DCM模型干預(yù)組隨機(jī)血糖均顯著高于健康對(duì)照組（NC+NS對(duì)照組、NC+Tempol對(duì)照組），P<0.05；DCM模型組及DCM模型干預(yù)組間隨機(jī)血糖無明顯差異，P>0.05；DCM模型組及DCM模型干預(yù)組體重較健康對(duì)照組明顯

6、降低，P<0.05；DCM模型干預(yù)組體重下降程度較DCM模型組小，P<0.05；健康對(duì)照組間血糖及體重均無明顯差異，P>0.05。
　　3、顯微鏡下觀察結(jié)果示：HE染色提示健康對(duì)照組間心肌細(xì)胞排列整齊，無心肌壞死及肌纖維的溶解；DCM模型組心肌細(xì)胞排列紊亂，可見肌纖維溶解、斷裂，部分心肌細(xì)胞腫脹、壞死；DCM模型干預(yù)組心肌損傷程度較DCM模型組減輕。Masson染色結(jié)果提示健康對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞及血管周圍僅有少許正常膠原纖維，無間

7、質(zhì)纖維化；DCM模型組、DCM模型干預(yù)組心肌較健康組存在明顯纖維化；DCM模型干預(yù)組心肌纖維化程度比DCM模型組輕。
　　4、4組大鼠血清ELISA結(jié)果提示：NC+NS對(duì)照組、NC+Tempol對(duì)照組、DCM模型組、DCM模型干預(yù)組血清3-NT濃度分別為：79.11±25.37nmol/L、99.98±24.99nmol/L、371.56±95.64nmol/L、246.31±81.37nmol/L；血清TGF-β1濃度分別為：1

8、07.02±30.53pg/ml、136.69±19.68pg/ml、347.07±57.85pg/ml、218.66±26.62pg/ml。DCM模型組與DCM模型干預(yù)組血清3-NT、TGF-β1的表達(dá)均明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；DCM模型干預(yù)組血清3-NT、TGF-β1的表達(dá)水平低于 DCM模型組，P<0.05；NC+NS對(duì)照組與NC+Tempol對(duì)照組間血清3-NT、TGF-β1的表達(dá)水平均無明顯差異，P

9、>0.05。
　　5、4組大鼠心肌組織免疫組化結(jié)果提示：NC+NS對(duì)照組、NC+Tempol對(duì)照組、DCM模型組、DCM模型干預(yù)組心肌3-NT表達(dá)量分別為：2512.38±1636.43、2935.69±1492.17、11684.89±2590.43、5625.41±1501.94；心肌TGF-β1表達(dá)量分別為：894.67±152.29、1001.72±215.04、8805.64±2893.75、4707.79±1121.1

10、3。DCM模型組與DCM模型干預(yù)組心肌3-NT、TGF-β1表達(dá)均明顯高于健康對(duì)照組，P<0.05；DCM模型干預(yù)組心肌3-NT、TGF-β1的表達(dá)水平低于DCM模型組，P<0.05；NC+NS對(duì)照組與NC+Tempol對(duì)照組間心肌3-NT、TGF-β1的表達(dá)量均無明顯差異，P>0.05。
　　結(jié)論：
　　1、通過腹腔注射STZ法誘導(dǎo)建立DC大鼠模型后，長(zhǎng)期的高血糖狀態(tài)可引起大鼠心肌不同程度的損傷。
　　2、DC高糖狀