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文檔簡(jiǎn)介
1、植物的形態(tài)建成很大一部分受到植物分枝發(fā)育影響,許多因素參與到植物分枝的生長(zhǎng)發(fā)育,主要包括環(huán)境因素和自身遺傳因素兩大方面。近幾年,通過對(duì)模式植物和農(nóng)作物株型分枝突變體的研究,人們對(duì)植物分枝發(fā)育調(diào)控機(jī)制機(jī)理有了更深入的了解和認(rèn)識(shí),并克隆了一系列調(diào)控分枝發(fā)育的重要基因,證明植物的分枝發(fā)育是通過激素與基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)相互作用的而得到控制的?;谝延械难芯砍晒?,我們開展了新型植物激素獨(dú)腳金內(nèi)酯對(duì)于植物腋芽發(fā)育的影響的研究,主要研究結(jié)果如下:
2、 1.本實(shí)驗(yàn)根據(jù)擬南芥、番茄中已有的關(guān)于獨(dú)腳金內(nèi)酯的研究,開展在煙草中的研究。通過RACE技術(shù)獲得煙草中NtMAX3,NtMAX4基因的全長(zhǎng)。并進(jìn)行簡(jiǎn)單的生物信息學(xué)分析。將NtMAX3序列與矮牽牛、番茄的氨基酸序列比對(duì),結(jié)果顯示普通煙草的NtMAX3的序列與矮牽牛相似度達(dá)到84.27%,與番茄的相似度為78.45%。同樣,煙草中NtMAX4序列與矮牽牛、番茄的比對(duì),結(jié)果顯示普通煙草的 NtMAX4基因的全長(zhǎng)序列與矮牽牛的相似性達(dá)到89
3、.95%,與番茄的相似度為85.79%。且兩者都具有 RPE65結(jié)構(gòu)域,此結(jié)構(gòu)域與其功能一致,與類胡蘿卜素加氧酶有關(guān),影響?yīng)毮_金內(nèi)酯的合成。NtMAX3、NtMAX4基因同屬于CCDs家族。已有的研究結(jié)果表明TCP轉(zhuǎn)錄組家族也參與到獨(dú)腳金內(nèi)酯的調(diào)控中,其中的 BRC基因與 MAX通路存在緊密的聯(lián)系,BRC基因作用于MAX途徑的下游,我們選取了通過對(duì)不同物種內(nèi)BRC基因進(jìn)行了簡(jiǎn)單的生物信息分析,以求進(jìn)一步了解該基因以及MAX途徑對(duì)腋芽控制
4、的作用。
2.根據(jù) NtMAX3、NtMAX4基因序列,我們分別設(shè)計(jì)了三組不同的干擾引物,NtMAX3基因的三個(gè)RNA干擾引物分別編號(hào)為1、2、3,而NtMAX4基因的三組RNA干擾引物的編號(hào)為21、12、22。通過Invitrogen公司 Gateway技術(shù),構(gòu)建RNAi表達(dá)載體,酶切驗(yàn)證獲得我們需要的表達(dá)載體。以普通煙草K326為試驗(yàn)材料,采用葉盤法經(jīng)過農(nóng)桿菌侵染將RNA干擾的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入K326葉片中,經(jīng)過培養(yǎng)獲得健壯的
5、小苗,共有102個(gè)株系,包括編號(hào)1有19個(gè)株系,編號(hào)2有26個(gè)株系,編號(hào)3有19個(gè)株系,編號(hào)12有9個(gè)株系,編號(hào)21有16個(gè)株系,編號(hào)22有13個(gè)株系。與對(duì)照組相比較,轉(zhuǎn)基因植株在不管是在幼苗期還是盛花期均有明顯的表型差異。經(jīng)溫室培養(yǎng)生長(zhǎng),獲得T0代種子。
3.根據(jù)T0代植株的陽(yáng)性鑒定及表型,我們選取了28個(gè)株系重新編號(hào),將獲得的親代種子進(jìn)行大田種植,在自然條件下觀察表型,對(duì)株高,腋芽數(shù)目進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。經(jīng)過調(diào)查我們發(fā)現(xiàn),相比較
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