應(yīng)用RNA干擾技術(shù)建立MMP-9基因沉默胃癌細(xì)胞克隆.pdf

1、惡性腫瘤的主要特征是浸潤和轉(zhuǎn)移，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜的降解為關(guān)鍵環(huán)節(jié)?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)作為蛋白水解酶的一種，能降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)成分，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移及間質(zhì)血管新生。胃癌組織中MMP-9檢測結(jié)果與臨床病理資料對比的研究表明，該酶不僅與胃癌的分化程度、分期、病理類型、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)，然而MMP-9基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的抑制作用尤其是RNA干擾對胃癌的影響尚未明了。 RNA干擾是由dsRNA介導(dǎo)的

2、同源mRNA降解，從而引起相應(yīng)基因沉默的一種廣泛存在于酵母、真菌、植物、動物體內(nèi)古老的生物防御機(jī)制。1998年后，許多研究小組對RNAi的機(jī)制和應(yīng)用進(jìn)行了大量的研究。在應(yīng)用方面主要是利用RNAi技術(shù)對線蟲、果蠅、植物、動物及病毒的某些基因進(jìn)行干擾，從而達(dá)到基因敲除或抑制病毒復(fù)制的目的。 本實驗?zāi)康模?是應(yīng)用質(zhì)粒載體將基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)特異性siRNA通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞，構(gòu)建了低分化胃腺癌細(xì)胞BGC823

3、的MMP-9基因沉默細(xì)胞模型； 方法： 應(yīng)用免疫熒光、western blot、明膠酶譜分析等方法驗證RNA干擾所得到的基因沉默胃癌細(xì)胞株。 結(jié)果： 本實驗應(yīng)用分子克隆技術(shù)結(jié)合RNA干擾技術(shù)在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平對特定基因MMP-9進(jìn)行抑制，從而對該基因在胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制進(jìn)行探討。實驗關(guān)鍵在于獲得較高干擾效果并篩選獲得成功轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞克隆。這將為后續(xù)的體內(nèi)外胃癌模型建立提供基礎(chǔ)。該RNA干擾模型建