補(bǔ)體片段C3a在足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、目的：
　　探討C3a對(duì)條件永生化溫度敏感小鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的影響。
　　方法：
　　分別用0.001μM、0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM C3a刺激分化成熟足細(xì)胞24小時(shí)，用RT-PCR檢測(cè)synaptopodin、podocin、nephrin、CD2AP、FSP-1、α-SMA、vimentin和I型膠原mRNA的表達(dá)。用Western Blot檢測(cè)nephrin、podocin、CD2A

2、P、FSP-1和α-SMA蛋白的表達(dá)。用免疫組化和免疫熒光檢測(cè)podocin、CD2AP、synaptopodin、FSP-1、vimentin和α-SMA蛋白表達(dá)和分布。
　　結(jié)果：
　　1、未分化足細(xì)胞呈鋪路石樣外觀(guān)，37℃無(wú)IFN-γ培養(yǎng)7-14天足細(xì)胞表達(dá)synaptopodin，足細(xì)胞分化成熟，細(xì)胞變大，并伸出突起。
　　2、免疫組化和免疫熒光：分化成熟足細(xì)胞表達(dá)synaptopodin、podocin和CD

3、2AP。0.1μM C3a刺激24h后，synaptopodin、podocin和CD2AP表達(dá)減少。分化成熟足細(xì)胞也有少量FSP-1、α-SMA、vimentin表達(dá)，0.1μM C3a刺激24h后，F(xiàn)SP-1、α-SMA和vimentin的表達(dá)增加。
　　3、RT-PCR結(jié)果：與對(duì)照組相比，隨著C3a濃度的增加synaptopodin、podocin、CD2AP和nephrin的mRNA表達(dá)減少，而FSP-1、α-SMA、vi

4、mentin和I型膠原mRNA逐漸增加。隨著C3a濃度（0.001-0.1μM）的增加，synaptopodin表達(dá)減少（P<0.05）；（0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a；0.03-0.1μM C3a與0.003-0.01μM C3a相比） synaptopodin表達(dá)減少（P<0.05）。（0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a；0.1μM C3a與0.03μM C3a相比）podocin mR

5、NA表達(dá)明顯減少（P<0.05）。（0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a；0.03-0.1μM C3a與0.01μM C3a；0.1μM C3a與0.03μM C3a相比） CD2AP和nephrin mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.05）。隨著C3a濃度（0.001-0.1μM）的增加FSP-1的表達(dá)增加（P<0.05）；（0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a；0.1μM C3a與0.003-0.0

6、3μM C3a） FSP-1 mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）。隨著C3a濃度（0.001-0.1μM）的增加α-SMA mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）；（0.003-0.1μM C3a與0.001μM C3a；0.01-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比）α-SMA mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）。隨著C3a濃度（0.003-0.1μM）的增加vimentin mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）；（0.0

7、1-0.1μM C3a與0.003μM C3a相比）vimentin mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）。（0.01-0.1μM C3a與0-0.003μM C3a；0.03μM C3a與0.01μM C3a；0.1μM C3a與0.03μM C3a相比）Collagen I mRNA表達(dá)明顯增加（P<0.05）
　　4、Wenstern blot結(jié)果：與對(duì)照組相比，隨著C3a濃度增加，足細(xì)胞的podocin、CD2AP和nep

8、hrin蛋白表達(dá)減少，F(xiàn)SP-1和α-SMA蛋白表達(dá)增加。（0.01-0.1μM C3a與對(duì)照組；0.03-0.1μM C3a與0.1μM C3a相比）nephrin蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05）。隨著 C3a濃度（0.01-0.1μM）的增加 podocin蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05）。(0.03-0.1μM C3a與0-0.01μM C3a；0.1μM C3a與0.03μM C3a相比）CD2AP表達(dá)明顯減少（P<0.05）。

9、（0.01-0.1μM C3a與對(duì)照組；0.1μM C3a與0.01-0.03μM C3a相比）FSP-1表達(dá)明顯增加（P<0.05）。（0.01-0.1μMC3a與對(duì)照組；0.03-0.1μMC3a與0.01μMC3a相比）α-SMA表達(dá)明顯減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、體外培養(yǎng)的成熟足細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生上皮-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
　　2、補(bǔ)體片段C3a可進(jìn)一步促進(jìn)體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)為隨著C3a