Methylcobalamin在背根節(jié)慢性壓迫大鼠模型上的外周鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制.pdf

1、背根節(jié)慢性壓迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)神經(jīng)病理性痛模型能有效的模擬腰椎間盤突出,椎管狹窄和腫瘤壓迫等原因造成的臨床上常見的腰背痛和坐骨神經(jīng)痛。CCD大鼠模型背根節(jié)神經(jīng)元膜上離子通道表達(dá)和功能改變導(dǎo)致其興奮性的變化,背根節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)有自發(fā)放電(spontaneous activity)出現(xiàn)。由于外周傳入沖動的增加,造成脊髓和

2、高位中樞的持續(xù)性興奮和敏化,導(dǎo)致神經(jīng)病理性痛癥狀的出現(xiàn)。損傷感覺神經(jīng)元胞體或軸突產(chǎn)生的自發(fā)放電是疼痛產(chǎn)生和維持的重要基礎(chǔ),異位自發(fā)放電成為評價和研究鎮(zhèn)痛藥物及其機(jī)制的一種手段。
　　最近的研究發(fā)現(xiàn)methylcobalamin(MeCbl)能夠改善非特異性腰痛患者的疼痛評分,有報(bào)道指出B12單獨(dú)使用或者與B1,B6聯(lián)合其使用有助于緩解SNL的觸誘發(fā)痛,SCI和CCD模型的熱痛覺敏化。但是也有研究報(bào)道MeCbl不能改善腰椎椎管狹窄患

3、者的疼痛癥狀。因此,對于MeCbl是否具有鎮(zhèn)痛作用仍存在爭議。MeCbl是否影響初級感覺神經(jīng)元的自發(fā)放電和興奮性尚不明確。本實(shí)驗(yàn)在CCD模型上,研究MeCbl對神經(jīng)病理性痛的作用及其機(jī)制。
　　超極化激活的內(nèi)向流(Hyperpolarization-activated inward currents,Ih)存在于DRG神經(jīng)元中。通過抑制神經(jīng)元超極化和促進(jìn)去極化調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的興奮性。以往研究顯示DRG慢性壓迫的感覺神經(jīng)元Ih電流密度增

4、加,然而,MeCbl是否影響DRG神經(jīng)元Ih電流密度未見報(bào)道。
　　主要結(jié)果:
　　1.CCD大鼠表現(xiàn)雙側(cè)后足觸誘發(fā)痛和損傷側(cè)熱痛覺敏化
　　術(shù)后21d內(nèi)觀察并測定CCD組和sham組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值和熱縮足潛伏期(TWL)。與sham組相比較,CCD組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值顯著下降(損傷側(cè):P<0.001;對側(cè):P<0.001,重復(fù)測量方差分析)。損傷側(cè)CCD組TWL較sham組明顯下降而對側(cè)不存在差異(損傷側(cè):P<0.0

5、01;對側(cè):P>0.05,重復(fù)測量方差分析)。
　　2.連續(xù)腹腔注射MeCbl明顯抑制CCD大鼠的觸誘發(fā)痛,對TWL無影響。
　　觀察長時程和短時程腹腔注射MeCbl對CCD大鼠的觸誘發(fā)痛和TWL的影響。數(shù)據(jù)顯示單次注射MeCbl在短時程不對CCD和sham組雙側(cè)機(jī)械縮足閾值和TWL產(chǎn)生作用(P=1.00,重復(fù)測量方差分析)。長時程中,在雙側(cè),均是5d,10d,18d,23d和28d5個點(diǎn)存在差異(損傷側(cè):P<0.05;對側(cè)

6、:P<0.01,重復(fù)測量方差分析)。長時程腹腔注射MeCbl(2.5mg/kg)在第5天開始出現(xiàn)抑制CCD大鼠雙側(cè)觸誘發(fā)痛的作用,并且有時間累積效應(yīng)。雖然CCD手術(shù)前后大鼠的TWL沒有顯著降低,在長時程的觀察中,CCD大鼠的TWL維持穩(wěn)定,說明長時程腹腔注射MeCbl不影響CCD大鼠雙側(cè)TWL。
　　3.MeCbl明顯抑制CCDDRGA-類神經(jīng)元的自發(fā)放電
　　在62例單纖維中,66.1％對MeCbl敏感,其中83.3%的單

7、位能在10min內(nèi)洗脫恢復(fù)至基線水平,濃度從3至300μM表現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。MeCbl(300μmol/L)對CCDA-類DRG神經(jīng)元周期和非周期放電模式的自發(fā)放電均有抑制作用,兩者之間不存在差異。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究MeCbl對CCD大鼠離體中型DRG神經(jīng)元自發(fā)放電的影響,發(fā)現(xiàn)在60s內(nèi),細(xì)胞的自發(fā)放電被完全抑制,并且洗脫10min內(nèi)恢復(fù)。
　　4.MeCbl明顯抑制CCD中型DRG細(xì)胞的興奮性
　　與sham組相比,

8、CCD大鼠中型DRG神經(jīng)元AP的幅值和最大上斜率都明顯增大(P<0.05,n=32,單因素方差分析)。而MeCbl顯著降低CCD中型DRG神經(jīng)元的興奮性,表現(xiàn)AP幅值、AHP幅值、最大上升斜率和最大下降斜率明顯下降(P<0.01,n=34,配對t檢驗(yàn));半寬顯著增大(P<0.05,n=34,配對t檢驗(yàn))。
　　5.MeCbl明顯減小CCDDRG中型DRG細(xì)胞的Ih電流密度
　　CCD組的超極化激活的Ih電流密度較sham組顯

9、著升高(P<0.05,重復(fù)測量方差分析)。MeCbl作用于CCD和sham組DRG,明顯降低CCD組中型DRG細(xì)胞Ih電流密度而不影響sham組(P<0.05,重復(fù)測量方差分析)。
　　主要結(jié)論:
　　1.長時程腹腔注射MeCbl可明顯抑制CCD大鼠雙側(cè)觸誘發(fā)痛,不影響CCD大鼠雙側(cè)TWL;對sham大鼠機(jī)械閾值無影響。
　　2.MeCbl明顯抑制在體、離體CCDDRGA-類神經(jīng)元的SA。MeCbl(300μmol/L