背根節(jié)慢性壓迫模型小細胞交感敏化的NO-cGMP-PKG信號通路研究.pdf

1、第一部分：背根節(jié)慢性壓迫模型小細胞交感敏化的NO-cGMP-PKG信號通路
　　交感維持性痛（SMP）是臨床一種常見的慢性痛，SMP是指通過阻滯支配疼痛發(fā)生區(qū)域的交感神經而得到緩解的疼痛，這類疼痛常表現出依賴交感神經活動及循環(huán)中兒茶酚胺水平的特征，即交感敏化。交感敏化在細胞水平的表現為交感神經刺激或腎上腺素類物質（NE）加入后，可引起神經元興奮性異常增高，表現為產生放電所需刺激強度的降低或原有異位自發(fā)放電的增多。DRG內的小細胞是

2、傳遞痛覺信息的神經元。在神經病理痛過程中，這類神經元存在超興奮現象，有報道C纖維上存在交感敏化，然而其胞體上是否存在交感敏化及參與調節(jié)其交感敏化的細胞內信號機制迄今未見報道。本研究擬回答如下問題：（一）在背根節(jié)慢性壓迫（CCD）模型背根節(jié)小細胞上是否存在交感敏化現象？（二）CCD模型后小細胞上如果存在交感敏化現象，參與介導敏化的胞內信號通路是哪條？本實驗按照這一思路進行研究。
　　目的：揭示CCD模型背根節(jié)小細胞上是否存在交感敏化

3、現象及其產生的信號通路。
　　方法：本研究以慢性背根節(jié)壓迫模型小鼠和正常C57小鼠為實驗對象，應用行為學檢測技術、膜片鉗技術，觀察損傷的DRG小細胞上的交感敏化現象，在此基礎上利用各種藥物探討交感敏化的細胞內信號轉導機制。
　　結果：
　　1、CCD建模后，模型組出現痛覺過敏現象。
　　縮足閾值（PWT）開始下降，7d時明顯低于對照組。CCD組與造模前相比，造模后7dPTW下降至0.13g，而對照組動物的PWT則

4、一直較恒定在0.32g。
　　2、CCD建模后小細胞出現交感敏化現象。
　　在CCD后DRG上直徑不超過25μm的神經元上，應用NE的反應有單純興奮作用、單純抑制作用、無作用和先興奮后抑制的作用。90例神經元中，單純興奮58例（64％），單純抑制14例（16％），無作用16例（18％），先興奮后抑制2例（2％）。而正常對照組10例神經元中，單純興奮2例，單純抑制2例，無作用6例。
　　3、α2受體阻斷劑可以抑制交感敏化

5、現象的產生
　　在CCD組出現交感敏化的小細胞上，通過利用α2受體阻斷劑育亨賓（Yohimbine）（10μM），可以抑制交感敏化現象的產生（n=8），據此推論在交感敏化現象中去甲腎上腺素作用受體為α2受體。
　　4、NO-cGMP-PKG信號通路參與介導NE對小細胞的興奮的作用。
　　通過利用NO供體SNAP（100μM），神經元的放電個數由(8.36±1.08)增加至(11.72±1.26),(P>0.05)；cG

6、MP阻斷劑ODQ則抑制了NE的興奮效應,放電個數由(14.09±2.02)減少至(8.64±1.88),(P<0.05)；PKG阻斷劑KT5823同樣抑制了NE的興奮效應,放電個數由(15.56±2.07)減少到(9±0.75),(P<0.05)。
　　結論：
　　1、CCD后部分DRG小細胞出現交感敏化現象。
　　2、交感敏化現象中去甲腎上腺素作用受體為α2受體。
　　3、NO-cGMP-PKG信號通路參與了交

7、感敏化現象的發(fā)生。
　　第二部分：影響DRG神經元興奮性的鉀通道機制的研究
　　大量文獻報道，受損DRG神經元的異位自發(fā)放電與神經病理性痛行為密切相關，關于異位自發(fā)放電的通道電流機制也有大量研究，研究結果顯示多種通道電流大小的改變是神經病理痛發(fā)生的一個重要因素。但迄今為止，還沒有文獻報道某種特定的放電模式（如周期放電、burst等）有著與其對應的疼痛特征，如外周神經損傷后的痛覺過敏、觸誘發(fā)痛和自發(fā)痛等，因此，很難將通道電流的

8、變化與痛信號模式的關系作出準確判斷，影響了痛信號產生機制的深入研究。
　　目的：本論文的第二部分實驗擬在證明“誘發(fā)簇放電（Evokedbursting,EB）”可能是觸誘發(fā)痛的痛信號的基礎上，對EB現象及其它神經病理性痛的通道電流機制進行深一步的研究。
　　方法：以正常大鼠和慢性背根節(jié)壓迫大鼠為實驗對象，利用離體整節(jié)DRG標本及膜片鉗技術，對EB及可能的交感敏化的離子通道機制進行深入探討。
　　結果：
　　α-D