Evn-50對人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺細胞株生長和凋亡的影響.pdf

1、目的:乳腺癌是婦女中最常見的惡性腫瘤,嚴重影響女性健康和生活質量。三苯氧胺能夠提高乳腺癌雌激素受體陽性患者的無病生存率和整體生存率,降低局部復發(fā)和同側復發(fā),在臨床上應用廣泛。近年來出現(xiàn)的三苯氧胺耐藥現(xiàn)象嚴重限制了其療效,是目前臨床上的亟待解決的主要問題。研究證實來自黃荊果實的乙酸乙酯提取物Evn-50具有廣譜抗腫瘤活性,可以抑制乳腺癌細胞在內的多種腫瘤細胞的生長和誘導細胞凋亡。本實驗通過研究Evn-50在體外對人乳腺癌MCF-7和MCF

2、-7/TAM-R細胞株的生長和凋亡的影響,探索Evn-50對乳腺癌TAM耐藥細胞的作用及其作用機制,為以后進一步的實驗研究和臨床應用提供初步依據(jù)。
　　 方法:持續(xù)用5uM的TAM誘導內分泌治療敏感的野生型人乳腺癌MCF-7細胞構建MCF-7/TAM-R細胞系;將每個細胞系分成四個亞組,分別加DMSO、5uMTAM、5uM TAM+50ug/ml Evn-50和50ug/ml Evn-50處理細胞;用MTT法測定細胞的活力和細胞

3、存活率,用PI單染流式細胞術檢測細胞凋亡率及G2/M期細胞比例,用免疫蛋白印記法觀察Evn-50在對TAM耐藥細胞株生長和凋亡影響中的作用機制。
　　 結果:正常MCF-7細胞與MCF-7/TAM-R細胞相比,前者加入TAM后顯微鏡下可見明顯的細胞碎片,其生長呈明顯下降趨勢,應用MTT法檢測細胞存活率,可以觀察到加入TAM72h后正常MCF-7細胞的存活率較耐藥組細胞明顯降低,有顯著性差異(**p＜0.01)。Evn-50單藥或

4、與TAM聯(lián)合均可以抑制MCF-7、MCF-7/TAM-R的細胞活力并降低其細胞存活率,且兩藥聯(lián)合時的作用更為明顯,與control組和TAM組比較有顯著性差異(**p＜0.01,*p＜0.05)。在Evn-50單藥或與TAM聯(lián)合均對MCF-7和MCF-7/TAM-R細胞的凋亡有明顯影響,且隨著作用時間的延長,細胞凋亡逐漸增多,在72h時,細胞凋亡率和G2期細胞比例的顯著性差異最為明顯(**p＜0.01)。Western Blot結果提示

5、TAM和Evn-50單獨或聯(lián)合處理MCF-7細胞后,磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平下調,而總AKT和MAPK44/42蛋白水平無變化。提示Evn-50可能通過下調AKT和MAPK信號通路來抑制人乳腺癌MCF-7細胞增長。而對MCF-7/TAM-R細胞,Evn-50與TAM單獨使用,對磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平均無明顯影響,當兩藥聯(lián)合使用時則具有降低磷酸化AKT(Ser473