治療脊髓損傷的中藥復(fù)方物效基礎(chǔ)研究.pdf

1、脊髓損傷（spinalcordinjury，SCI）的發(fā)病率隨著時(shí)代的進(jìn)步節(jié)節(jié)攀升，2002年北京地區(qū)脊髓損傷的發(fā)病率為60/百萬人口，而這一數(shù)據(jù)在20世紀(jì)80年代僅為6.8/百萬人口。該疾病主要侵害青壯年，治療以及護(hù)理所需花費(fèi)極大，且致殘率和致死率居高不下，超過50％的患者表現(xiàn)為截癱，已成為現(xiàn)代社會(huì)一個(gè)亟待解決的醫(yī)學(xué)問題。然而針對(duì)脊髓損傷，全世界范圍內(nèi)目前并沒有真正行之有效的治療方法，只有損傷早期大劑量應(yīng)用甲基強(qiáng)的松龍的療效得到了肯定

2、。然而此療法會(huì)產(chǎn)生一系列副作用，同時(shí)也有文獻(xiàn)指出此方法是否真正有效還值得商榷。造成此種“無藥可醫(yī)”現(xiàn)狀背后的原因是脊髓損傷極其復(fù)雜的損傷機(jī)制。除了損傷早期的“原發(fā)性機(jī)械損傷”外，損傷之后脊髓受損部位還會(huì)發(fā)生一系列復(fù)雜的病理生理反應(yīng)和生化反應(yīng)，稱為“繼發(fā)性損傷”。繼發(fā)性損傷涉及微循環(huán)障礙，局部電解質(zhì)紊亂，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，炎癥，細(xì)胞凋亡，膠質(zhì)瘢痕形成等諸多方面，而目前的治療主要針對(duì)其中一個(gè)到兩個(gè)機(jī)制對(duì)癥治療，收效甚微。
　　祖國(guó)傳統(tǒng)中

3、藥復(fù)方成分復(fù)雜，針對(duì)脊髓損傷復(fù)雜的損傷機(jī)制，多管齊下，同時(shí)中藥價(jià)格低廉，副作用小，而且已有文獻(xiàn)證實(shí)了部分中藥及其有效成分的療效。所以開展治療脊髓損傷的中藥復(fù)方物效基礎(chǔ)研究將是本領(lǐng)域的重要方向。
　　第一部分復(fù)方組成的藥學(xué)基礎(chǔ)研究
　　目的：按照分子中藥學(xué)和方證組方理論，探討治療脊髓損傷的中藥復(fù)方的組成及其物效基礎(chǔ)，為研制脊髓損傷治療藥物提供理論支持。
　　方法：查閱文獻(xiàn)，復(fù)習(xí)相關(guān)中醫(yī)中藥基礎(chǔ)理論，篩選相關(guān)中藥。將備選中

4、藥按照方證組方理論分組，分別行水煎煮和乙醇回流提取，用TLC和HPLC方法檢測(cè)其物效成分含量的變化趨勢(shì)。
　　結(jié)果：①選擇丹參，三七，川芎為備選中藥。②總體而言，醇提取物中有效成分提取率普遍高于水提取物。③三七對(duì)丹酚酸B的提取率在水提取物中影響不大，在醇提取物中可使其升高28.35％；川芎對(duì)丹酚酸B的提取率影響不大；三七+川芎對(duì)丹酚酸B的提取率在水提取物中影響不大，在醇提取物中可使其升高23.69％；④水提取物中幾乎不含丹參酮ⅡА

5、；三七可使丹參酮ⅡА的提取率升高16.66％；川芎可使丹參酮ⅡА的提取率降低57.34％；三七可以減輕川芎對(duì)丹參酮ⅡА提取率的降低程度，即丹參與川芎共同提取，加入三七后，丹參酮ⅡА提取率增加了54.97％；⑤丹參使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分別升高116.91％和64.73％；三七使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分別升高381.94％和171.84％；丹參+三七使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分別升高255.25％和82

6、.56％；⑥丹參可使三七皂苷R1在水提取物中的提取率降低38.52％，在醇提取物中影響不大；川芎可使三七皂苷R1在水提取物中的提取率升高128.79％，在醇提取物中影響不大；丹參+川芎對(duì)三七皂苷R1在水提取物中的提取率影響不大，可使其在醇提取物中升高95.38％；⑦丹參可使人參皂苷Rg1在水提取物中的提取率降低150.49％，在醇提取物中的提取率升高20.57％；川芎可使人參皂苷Rg1在水提取物中的提取率升高45.38％，在醇提取物中的

7、提取率降低50.52％；丹參+三七可使人參皂苷Rg1在水、醇提取物中的提取率分別降低40.33％和17.69％；⑧丹參可使人參皂苷Rb1在水提取物中的提取率降低53.78％，在醇提取物中的提取率升高59.13％；川芎可使人參皂苷Rb1在水提取物中的提取率升高44.31％，在醇提取物中的提取率降低48.25％；丹參+三七可使人參皂苷Rb1在水提取物中的提取率降低50.75％，在醇提取物中的提取率升高17.39％。
　　結(jié)論：①選擇丹

8、參，三七，川芎為候選中藥；②推薦“丹參+三七+川芎”采用乙醇提取方法可獲得中藥組方中活血化瘀類物效成分最大效率。
　　第二部分中藥復(fù)方及其提取物對(duì)大鼠急性脊髓損傷的藥效學(xué)研究
　　目的：根據(jù)實(shí)驗(yàn)一獲得的中藥組方，進(jìn)一步評(píng)價(jià)其對(duì)大鼠急性脊髓損傷的治療作用。
　　方法：132只雌性SD大鼠，隨機(jī)分成丹參組，三七組，川芎組，丹參+三七+川芎組，對(duì)照組，假手術(shù)組等6組，每組22只。各給藥組先行灌胃給藥10d,每天一次，然后采用

9、Allen’s打擊法造模，造模成功后繼續(xù)灌胃直至處死，分別于造模后1d，3d，5d，1w，2w，4w，6w，8w行BBB評(píng)分，評(píng)價(jià)大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)等情況。分別對(duì)1w，2w，4w，8w組大鼠脊髓組織行HE染色檢查其病理變化（每組4只），用免疫組化方法檢查脊髓損傷后4W各組GFAP在損傷脊髓組織內(nèi)的表達(dá)變化（每組4只）。用ELISA方法檢測(cè)損傷后72小時(shí)脊髓組織勻漿caspase-3、IL-1β、IL-10的含量，分別檢測(cè)血清和脊髓組織勻漿