版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、南方醫(yī)科大學(xué)2009級碩士學(xué)位論文可雙歧桿菌表達重組人GraBVRB融合蛋白對KDR陽性細胞的影響GranzymeBVEGFReceptor—BindingPeptide(GraB—VRB)FusionProteinExpressedinBtongumInducesApoptosisofKDRpositiveCells課題來源:廣東省醫(yī)學(xué)研究基金(項目:A2009412)專業(yè)名稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師答辯委員會主席答辯委員會成員腫瘤學(xué)陳蕾鄭
2、航副教授曾位森副研究員陳龍華教授李金瀚教授李宇紅教授宋立兵教授張文清教授論文評閱人張為民教授袁亞維教授2011年6月2日廣州中文摘要GraBVRB融合蛋白能否作用于KDR陽性的血管內(nèi)皮細胞和腫瘤細胞及其作用,為口服這種工程化雙歧桿菌使之在腸道內(nèi)表達重組GraBVRB,靶向性地作用于新生血管內(nèi)皮細胞,治療有關(guān)腸道腫瘤提供一定的實驗依據(jù)。2方法21細菌及細胞的培養(yǎng)雙歧桿菌接種于MRS培養(yǎng)基中,37℃厭氧培養(yǎng)。各種細胞株均培養(yǎng)于含10%NCS
3、的RPMI1640培養(yǎng)基中,置37℃,5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2d換液傳代1次。將細胞洗滌后供實驗用,實驗用細胞為狀況良好的對數(shù)生長期細胞。22重組表達載體轉(zhuǎn)化雙歧桿菌采用電穿孔法。在電壓25kV、電容25心、電阻200Q條件下,將3種重組表達載體分別轉(zhuǎn)入雙歧桿菌。將轉(zhuǎn)化后雙歧桿菌接種于含60pg/ml氨芐西林的MRS固體選擇培養(yǎng)基,37℃厭氧培養(yǎng)。挑取乳白色、圓形邊緣光滑完整的陽性菌落,接種于MRS液體培養(yǎng)基中,37℃厭氧培養(yǎng)。23重
4、組蛋白的誘導(dǎo)表達為了將外源基因轉(zhuǎn)化雙歧桿菌的表達產(chǎn)物直接用于有關(guān)細胞實驗中,重組蛋白的誘導(dǎo)表達在PRMI1640培養(yǎng)液(用丙酸調(diào)節(jié)pH值65左右)中進行?;蜣D(zhuǎn)化雙歧桿菌接種于PRMI1640培養(yǎng)基后,37℃厭氧培養(yǎng)至OD650nm為06“10時,加終濃度為02%的L邛可拉伯糖誘導(dǎo)表達培養(yǎng)24h。取樣分離上清和茵體進行鑒定。小量分裝培養(yǎng)上清,70℃保存?zhèn)溆谩?4ELISA采用VEGFELISA試劑盒測定培養(yǎng)上清中d1VRB的含量,以Gr
5、aBELISA試劑盒測定培養(yǎng)上清中rhGraB和rhGraBVRB的含量,操作按ELISA試劑盒說明書進行。培養(yǎng)上清中重組蛋白的濃度,根據(jù)ELISA測定結(jié)果和各重組蛋白的計算分子質(zhì)量折算為mol濃度。25免疫印跡分別取經(jīng)L邛可拉伯糖誘導(dǎo)表達24h的轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌菌體和培養(yǎng)上清,經(jīng)樣品處理液煮沸處理后,進行SDSPAGE(12%凝膠);電泳完成后,將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,5%脫脂奶粉封閉過夜,加抗Grab單克隆抗體室溫反應(yīng)2h,洗滌后加
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 短雙歧桿菌α-半乳糖苷酶基因及其重組表達研究.pdf
- 雙歧桿菌胞壁蛋白誘導(dǎo)人腸腺上皮細胞β-防御素-2基因表達及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制.pdf
- 雙歧桿菌研究
- 長雙歧桿菌和短雙歧桿菌的耐酸機制研究.pdf
- 大腸桿菌表達重組人胰激肽原酶.pdf
- 重組人白細胞介素12雙亞基融合基因在樹突狀細胞表達的初步研究.pdf
- 56756.雙歧桿菌表達體系的構(gòu)建
- Aif-T18融合蛋白對TEM1陽性細胞的體外殺傷效果評價.pdf
- 大腸桿菌表達的重組人成骨蛋白-1的純化和復(fù)性.pdf
- 重組人Hexastatin蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達及蛋白純化.pdf
- 重組雙歧桿菌-LTB疫苗免疫大鼠后抗體分泌部位的組織細胞定位.pdf
- 重組人成骨蛋白-1在大腸桿菌中的高效表達及復(fù)性.pdf
- 酵母粉誘導(dǎo)重組人甲狀旁腺激素表達研究.pdf
- 人胚胎干細胞向胰島素陽性細胞誘導(dǎo)分化體系的優(yōu)化.pdf
- 重組人凋亡素2配體對放射線誘導(dǎo)肺腺癌A549細胞凋亡作用的研究.pdf
- 人乳鐵蛋白表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因陽性細胞株的建立.pdf
- 雙歧桿菌表達ETEC-CFA-Ⅰ重組口服活疫苗對OVA免疫增效作用的研究.pdf
- 腦膠質(zhì)瘤組織中CD133陽性細胞和Nestin陽性細胞增殖指數(shù)的研究.pdf
- 雙歧桿菌對樹突狀細胞影響的實驗研究.pdf
- 15699.重組人巨細胞病毒外被蛋白基因的表達
評論
0/150
提交評論