Aif-T18融合蛋白對(duì)TEM1陽(yáng)性細(xì)胞的體外殺傷效果評(píng)價(jià).pdf

1、背景與目的：
　　惡性腫瘤的發(fā)病率近年來(lái)逐漸上升，嚴(yán)重威脅人體的生命和健康。雖然對(duì)癌癥的治療有手術(shù)，放化療以及靶向治療等方法，但都有其固有的局限性。因此，尋找新的穩(wěn)定作用靶位，開(kāi)發(fā)特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的新型藥物具有重要的臨床意義。腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志分子1（TEM1）可在近乎所有實(shí)體瘤特別是卵巢癌相關(guān)細(xì)胞中大量表達(dá)，而在正常細(xì)胞中不表達(dá)或者表達(dá)水平很低。因此，TEM1可以作為腫瘤血管治療的標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究中利用酵母抗體庫(kù)篩選分

2、離出了可同時(shí)結(jié)合人類(lèi)和鼠類(lèi)TEM1的高親和力、特異性單鏈抗體（scFvT18）。本研究中，我們主要利用單鏈抗體scFvT18選擇性攜帶凋亡誘導(dǎo)因子AIF，靶向抑殺TEM1陽(yáng)性細(xì)胞，從而為Aif-T18融合蛋白在腫瘤治療中的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建 pIRES-TEM1-EGFP重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染 TEM1陰性細(xì)胞MS1并利用G418篩選出TEM1陽(yáng)性細(xì)胞系（MS1-TEM1）；構(gòu)建pET302

3、-Aif和pET302-Aif-T18（將scFvT18基因與AIF基因融合）重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌BL21中，IPTG誘導(dǎo)得到所需的目的蛋白，之后利用流式細(xì)胞技術(shù)和MTT檢測(cè)融合蛋白對(duì)MS1和MS1-TEM1細(xì)胞的親和力以及殺傷效果。
　　結(jié)果：
　　成功構(gòu)建了 MS1-TEM1穩(wěn)定細(xì)胞系，細(xì)胞流式結(jié)果顯示：Aif-T18對(duì)MS1-TEM1細(xì)胞具有較強(qiáng)的結(jié)合能力，靶向性良好；MTT結(jié)果顯示72 h后， Aif-T18對(duì)