桉樹EST-CAPS標記的開發(fā)及其用于遺傳圖譜構建的研究.pdf

1、遺傳圖譜構建是當前植物遺傳研究的熱點，但林木遺傳圖譜構建中存在密度較低、共顯性標記不多、基于功能基因的標記缺乏等問題，如何開發(fā)共顯性的、基于功能基因的分子標記并用于林木遺傳圖譜構建是急需解決的問題。桉樹在全球范圍內(nèi)是重要的造林樹種，也是林木遺傳研究的模式樹種，其遺傳圖譜構建具有重要的理論意義和應用價值。 利用從GeneBank下載的細葉桉54條EST序列，進行了引物設計利PCR擴增條件優(yōu)化，有35對引物能成功進行PCR擴增。利用

2、30種限制性內(nèi)切酶對可成功PCR擴增的35個EST序列在尾葉桉×細葉桉F1作圖譜系的多態(tài)性進行了篩選，分析了EST-CAPS標記的分離方式，并將多態(tài)性的EST-CAPS標記整合到尾葉桉和細葉桉的RAPD遺傳圖譜上。 分離方式研究中，有7個EST序列可用合適的限制性內(nèi)切酶酶切并在作圖譜系中產(chǎn)生多態(tài)性，即產(chǎn)生EST-CAPS標記，其中5個EST-CAPS標記呈1∶1的分離，包括1個偏離孟德爾分離(α=0.05)；另外2個EST-CA

3、PS標記呈1∶1∶1∶1的分離，且均符合孟德爾分離。孟德爾正態(tài)分離的EST-CAPS標記比例達85.7％，偏分離標記比例為14.3％，表明EST-CAPS標記是一種可靠的遺傳標記，可用于桉屬樹種遺傳圖譜構建和相關研究。 在分離方式研究的基礎上進行了遺傳圖譜構建的研究，運用作圖軟件Mapmaker3.0將EST-CAPS標記整合到已構建的RAPD遺傳圖譜上，結(jié)果表明：3個EST-CAPS標記分別整合到尾葉桉的第1、11和15連鎖群

4、上，標記EST-CD668626與3個原RAPD標記組成新的連鎖群，基于RAPD-CAPS的尾葉桉新圖譜包含24個連鎖群，新增連鎖群1個，總遺傳圖距1546.1cM，標記間的平均距離為10.8cM。另有1個偏分離標記未能連鎖到任何連鎖群上。整合4個EST-CAPS標記后的細葉桉新圖譜總遺傳圖距1122.5cM，分布于23個連鎖群上，標記間的平均距離為10.2cM。4個標記分布于第6、7、8和第10連鎖群上?；赗APD-CAPS的尾葉桉