干細(xì)胞治療急性腎臟缺血的研究.pdf

1、腎功能衰竭是住院患者致死率高的一種疾病。急性缺血性腎損傷被認(rèn)為可導(dǎo)致急性腎功能衰竭，急性腎功能衰竭可進(jìn)一步導(dǎo)致慢性腎臟疾病的發(fā)作和腎功能衰竭。長(zhǎng)期的缺血性內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和微血管損傷造成腎臟功能失靈。在過去的十年中，大量的研究工作都集中在對(duì)組織損傷的細(xì)胞療法的發(fā)展，包括自體移植成體干細(xì)胞、骨髓和外周血來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)、人類內(nèi)皮細(xì)胞與平滑肌祖細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的共移植等。
　　內(nèi)皮細(xì)胞治療可改善血管再生，尤其

2、是促進(jìn)功能性微脈管系統(tǒng)的再生，被認(rèn)為是一個(gè)很有潛力的治療方案。然而，還未有研究直接檢查內(nèi)皮細(xì)胞治療對(duì)腎復(fù)蘇的影響作用。本論文第一部分主要探討內(nèi)皮細(xì)胞在小鼠急性腎損傷模型中的療效。首先將人類胚胎干細(xì)胞中提取的內(nèi)皮細(xì)胞(hESC-ECs)用一個(gè)熒光素酶和綠色熒光蛋白(GFP)共同編碼的雙融合報(bào)告基因標(biāo)記。培養(yǎng)的hESC-ECs(1×106)被注射到急性缺血/再灌注腎，通過活體成像技術(shù)監(jiān)控體內(nèi)hESC-ECs從移植后的第1天到第14天的生存情

3、況。通過組織學(xué)分析評(píng)估內(nèi)皮細(xì)胞移植對(duì)hESC-EC治療腎再生潛在的影響。我們發(fā)現(xiàn)hESC-EC注入24小時(shí)內(nèi)可見穩(wěn)定的生物熒光活動(dòng)，但隨著時(shí)間推移熒光信號(hào)逐漸減弱。通過計(jì)數(shù)BrdU+細(xì)胞數(shù)發(fā)現(xiàn)hESC-ECs顯著加速缺血損傷區(qū)的腎細(xì)胞增殖。Sca-1(腎臟干細(xì)胞標(biāo)記)和BrdU的共表達(dá)染色發(fā)現(xiàn)hESC-EC治療腎再生潛在的影響部分要?dú)w功于增加腎干細(xì)胞的增殖。hESC-ECs在注射入動(dòng)物體內(nèi)的早期階段可分化平滑肌細(xì)胞?？傊?，我們的結(jié)果表明

4、，內(nèi)皮細(xì)胞療法通過促進(jìn)血管化、轉(zhuǎn)分化和內(nèi)生腎干細(xì)胞的增殖促進(jìn)腎功能恢復(fù)。
　　骨髓(BM)干細(xì)胞已有報(bào)告稱有助于腎損傷模型后的組織修復(fù)。然而，到目前為止沒有直接證據(jù)表明骨髓細(xì)胞可以轉(zhuǎn)分化為腎干細(xì)胞。為了調(diào)查骨髓干細(xì)胞是否有助于腎干細(xì)胞池的重新補(bǔ)充，在本文的第二部分我們移植表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓細(xì)胞到受到輻射損傷的受體中。受體動(dòng)物骨髓再造和缺血/再灌注損傷后，通過免疫染色和流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)Sca-1+和c-Kit+腎干