阿托伐他汀、羅格列酮聯(lián)合應(yīng)用對(duì)2型糖尿病大鼠腎組織中TGF-β1等細(xì)胞因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察阿托伐他汀、羅格列酮及阿托伐他汀、羅格列酮聯(lián)合應(yīng)用對(duì)糖尿病大鼠腎組織FGF-β1、TIMP-1、MMP-2、MMP-9及c-fos的mRNA及蛋白的表達(dá)水平；探討其與腎組織微結(jié)構(gòu)改變和腎功能變化的關(guān)系及阿托伐他汀與羅格列酮聯(lián)合應(yīng)用對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的優(yōu)勢(shì)及其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組。
　　 75只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A組）、糖尿病組（B組）、阿托伐他汀干預(yù)糖尿病

2、組（C組）、羅格列酮干預(yù)糖尿病組（D組）及羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)糖尿病組（E組），每組15只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，糖尿病組：死亡5只，阿托伐他汀干預(yù)組：死亡2只，羅格列酮干預(yù)組：死亡1只，聯(lián)合干預(yù)組：死亡0只。
　　 2.研究方法及觀察指標(biāo)。
　　 血糖采用美國(guó)強(qiáng)生Surestep血糖儀測(cè)定；血脂采用Humalyzer 2000半自動(dòng)生化分析儀按常規(guī)測(cè)定。血管緊張素Ⅱ、血肌酐采用均相競(jìng)爭(zhēng)放射免疫分析法。代謝籠收集記錄24h

3、尿量，-20℃保存，供考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定尿蛋白。采用RT-PCR方法檢測(cè)各組大鼠腎臟組織中TGF-β1、TIMP-1、MMP-2、MMP-9、c-fos的mRNA表達(dá)水平，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)上述細(xì)胞因子蛋白表達(dá)，Masson染色觀察腎臟組織膠原代謝的改變，HE染色觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.糖尿病大鼠腎臟改變及藥物干預(yù)影響。
　　 實(shí)驗(yàn)過程中正常對(duì)照組大鼠飲食水、生長(zhǎng)正常，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈

4、敏，皮毛有光澤。糖尿病大鼠均表現(xiàn)為多飲、多尿、多食、皮毛粗躁、反應(yīng)遲鈍、活動(dòng)減少等癥狀，每天需換墊料一兩次。糖尿病組大鼠的血肌酐、24h尿蛋白及右腎重/體重比明顯高于正常對(duì)照組147.20±1.91 vs 54.89±1.03；0.0446±0.0010 vs 0.0165±0.0005；0.0088±0.0003 vs 0.0039±0.0006（P<0.01）。阿托伐他汀、羅格列酮、羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)12周后與糖尿病組相比

5、，血肌酐水平分別為：94.78±6.13、86.89±3.05、72.44±2.15；24h尿蛋白分別為：0.0356±0.0009、0.0300±0.0003、0.0264±0.006；右腎重/體重比分別為：0.0049±0.003、0.0046±0.003、0.0042±0.003，與糖尿病大鼠相比均有改善（P<0.05），尤以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)降低最為顯著（P<0.01）。
　　 2.生化指標(biāo)的改變。
　　

6、 糖尿病組：血糖、甘油三酯、總膽固醇及血管緊張素Ⅱ水平均明顯均明顯高于正常對(duì)照組，分別為20.16±2.35 vs5.57±0.87、2.94±0.16 vs 0.80±0.19、4.59±0.69 vs 1.18±0.50及1803.39±144.20 vs 67.70±15.27（P<0.01）。糖尿病模型大鼠經(jīng)3種不同的干預(yù)治療12周后，阿托伐他汀干預(yù)組甘油三酯及總膽固醇水平為：1.76±0.31、3.10±0.30，較糖尿病組

7、明顯下降（P<0.01）；羅格列酮干預(yù)組血糖、血管緊張素Ⅱ水平為：12.81±0.72、724.27±57.18，與糖尿病組相比顯著降低（P<0.01）；聯(lián)合干預(yù)組血糖、甘油三酯、總膽固醇及血管緊張素Ⅱ均顯著改善：10.48±1.78、1.31±0.31、2.49±0.32、320.67±33.90（P<0.01）。
　　 3.病理學(xué)改變。
　　 HE染色切片高倍鏡（×400）下顯示：正常對(duì)照組腎小球及小管間質(zhì)未見明顯的

8、病理改變。DM模型組大鼠12w時(shí)腎小球體積增大，部分近端腎小管上皮細(xì)胞呈空泡樣變性，腎小球系膜區(qū)擴(kuò)大、系膜增多，系膜細(xì)胞增生，基質(zhì)明顯增多，腎小球基底膜增厚，毛細(xì)血管狹窄甚至閉塞，小管間質(zhì)散在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，說明模型已出現(xiàn)DN的典型腎臟損害病理改變。羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組可見上述病理改變有明顯減輕，而在羅格列酮組、阿托伐他汀組亦可見上述病理改變有不同程度減輕。
　　 4.各組大鼠腎臟組織膠原代謝的改變。
　　 Ma

9、sson染色可見正常對(duì)照組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜有少量膠原纖維，膠原面密度為0.0123±0.0006。與正常對(duì)照組相比，糖尿病大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜及腎間質(zhì)膠原纖維增多，排列紊亂，膠原面密度為0.2672±0.0081，明顯高于對(duì)照組（p<0.01）。羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組腎組織著色明顯淺淡稀疏，腎小球毛細(xì)血管基底膜及腎間質(zhì)周圍膠原纖維，積聚明顯減輕，排列趨于規(guī)則，膠原面密度為0.0448±0.0005，明顯低于糖尿病組（

10、p<0.01）。阿托伐他汀組及羅格列酮組膠原面密度分別為0.0956±0.0026，0.0907±0.0044，較糖尿病組大鼠膠原纖維積聚有不同程度減輕，排列明顯趨于規(guī)則。但兩組間未有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 5.TGF-β1、c-fos、TIMP-1、MMP-2及MMP-9的基因與蛋白表達(dá)。
　　 5.1 TGF-β1：
　　 5.1.1 免疫組化顯示：阿托伐他汀、羅格列酮、羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)

11、合干預(yù)12周后與糖尿病組相比，TGF-β1蛋白水平：0.1254±0.0032、0.1345±0.0039、0.0992±0.0067，表達(dá)量呈下降趨勢(shì)，其中以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組明顯降低（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.1.2 基因表達(dá)顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)最為顯著，羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.0

12、5）。
　　 5.2 c-fos：
　　 5.2.1 免疫組化顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組明顯降低（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.2.2 基因表達(dá)顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組明顯降低（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.3 TIMP-1：

13、　　 5.3.1 免疫組化顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組明顯降低（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.3.2 基因表達(dá)顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組明顯降低（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.4 MMP-2：
　　 5.4.1 免疫組化顯示：阿托伐他汀、羅格列

14、酮、羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)12周后與糖尿病組相比：MMP-2表達(dá)較DM組呈恢復(fù)性上調(diào)：0.0922±0.0053、0.0816±0.0049、0.1005±0.0055（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 5.4.2 基因表達(dá)顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組最為明顯（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05

15、）。
　　 5.5 MMP-9：
　　 5.5.1 免疫組化顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組最為明顯（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　 5.5.2 基因表達(dá)顯示：以羅格列酮+阿托伐他汀聯(lián)合干預(yù)組最為明顯（p<0.01）。而在羅格列酮和阿托伐他汀兩組之間未有明顯差別，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 6 相關(guān)分析：
　　 以腎臟組織

16、膠原密度含量為因變量，Crea、TGF-β1、TIMP-1、c-fos、MMP-2、MMP-9為自變量，進(jìn)行直線相關(guān)性分析，顯示腎臟組織膠原密度含量與Crea呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.98（p<0.01）；與TGF-β1、TIMP-1、c-fos、MMP-9呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.89；r=0.86；r=0.88；F0.82（p<0.01）；與MMP-2呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=-0.89（p<0.01）。
　　 結(jié)論：