肺癌轉移相關基因(ABCE1)的篩選及RNAi對肺癌細胞95-D增殖、黏附因子的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文肺癌轉移相關基因（ABCE1）的篩選及RNAi對肺癌細胞95-D增殖、黏附因子的影響姓名：鄭毛根申請學位級別：博士專業(yè)：胸外科指導教師：田大力20080301材料與方法一、材料( 一) 標本細胞株1 、標本： 四種肺癌標本均來源于中國醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院胸外科2 0 0 6年3 月一6 月的手術切除的肺癌標本；其中小細胞肺癌病灶標本1 例，小細胞肺癌淋巴結轉移病灶1 例，肺腺癌病灶標本1 例，低分化鱗癌轉移淋巴

2、結病灶1 例。2 、細胞株： 人肺腺癌細胞株9 5 一D 、小細胞肺癌細胞株N C I - H 2 9 2 、N C I - H 4 4 6均購自中科院上海細胞所。( 二) 、主要試劑m R N A 提取試劑盒、R A C E c D N A 擴增試劑盒、P C R 試劑盒、T r i z o l 試劑、M - M u L V逆轉錄酶、T 4 D N A 連接酶、B s t ZI 限制性內切酶、胰蛋白酶、G 4 1 8 ( G i b

3、c o - B R L ) 、轉染試劑F U G E N E 6 、E L I S A 試劑盒、M T T 試劑盒、兔抗人上皮性鈣砧附蛋白單克隆抗體( ( 4 A 2 C 7 ) 、兔抗人B _ 連接素單克隆抗體( C A T - S H1 0 ) 、即用型S P 試劑盒、D A B 試劑盒等。二、方法l 、三種肺癌細胞株及四種肺癌手術標本總R N A 的提取。2 、運用R T - P C R 技術中，對肺癌轉移相關基因C 1 ，L 1

4、 ，L 2 片段進行驗證，釣取目的片段。3 、運用R A C E ( c D N A 末端快速擴增) 技術克隆出其基因全長序列，并登錄G e n b a n k ，進行序列比對，確定克隆的基因性質。4 、根據(jù)A B C E I 基因，設計發(fā)卡結構序列長度為7 lb P 的兩對有效干擾和一對負對照的反向重復序列，其兩端帶有B a m HI 、H i n dI l l 酶切位點，中間被9b p 環(huán)結構分割。并以6 個T 作為R N A 聚合